植物胚胎培养.ppt

第 七 章 植 物 胚 胎 培 养;7.1 胚胎培养的内容及意义;（一）植物受精不育的机理 （二）打破种子休眠 （三）缩短育种周期 （四）克服种子生活力低下提高萌发率 （五）克服种子的自然不育性 （六）种子生活力的测定;（一） 植物受精不育的机理; （2）植物受精不育障碍的表现形式;（二） 打破种子休眠;（三） 缩短育种周期;（四） 克服种子生活力低下提高萌发率;（五） 克服种子的自然不育性;（六） 种子生活力的测定; 总 结胚胎培养的意义;7.1.2 胚胎培养的内容和概念;主 要 内 容;(一) 胚培养 1）成熟胚培养：指子叶已形成的种胚。仅提供一定温度、湿度就可以发芽长成植物体。如种子发芽。 2）幼胚培养：胚龄处于原胚期、球型期、心型期、早鱼雷期的幼胚的培养。这几个时期幼胚从生理至形态均未成熟，提供一定温度和湿度均不能发芽。在远缘杂交育种上幼胚培养有极大的利用价值。;(二) 胚珠培养;;(三)胚乳培养 指处于细胞期胚乳的离体培养。 (四)试管受精 指培养未受精的胚珠并在试管内撒播花粉，使其受精形成具有生活力的种子。;7. 2 胚 培 养;7.2.1 离体胚培养的方法; 种子植物离体的成熟胚，在只含大量元素的无机盐和糖的培养基上就可萌发生长。对成熟胚的培养而言，大多是利用这种技术来研究胚发育过程的形态建成、生长物质的作用、各部分的相互关系，以及营养要求等生理问题。;（二）幼胚 发育早期的幼胚，由于胚胎发育要求更为完全的人工合成培养基，而且剥离技术要求很高，用成熟胚的培养方法很难成功，可以采用胚珠预培养的方法。 具体做法：将授粉后的子房剥出用药剂进行表面消毒，在无菌条件下切取胚珠进行预培养。培养一定时间后，再将胚从胚珠中剥出，接着培养裸露的胚，使其在人工控制的条件下，发育成一棵完整的植物体。; 从离体胚到完整的植株，其发育途径有3条： 1、正常胚胎发育途径 2、脱分化形成愈伤组织 3、早熟萌发产生畸形苗;7.2.2 胚龄与胚性发育的关系; 胚龄 胚长度（μm） 营养需要（培养基营养） 早球形胚 20－60 小于40μm长的胚尚不清楚 后球形胚 61－80 大量、微量、VB1、VB6、烟酸、糖2％、IAAO.1mg/L十KTO．001 mg／L 心形胚 81—450 大量、微量、VB1、VB6、烟酸、糖2％ 鱼雷胚 451－700 Ca（NO3）2480、KNO363、KCl42、MgSo463 KH2Po442、VB1、VB6、烟酸、糖2％ 成熟胚（手杖胚）最大极限（700μm） Ca（NO3）2480、KNO363、KCl42、MgSo463、糖 2％ ;结果表明：;适宜胚胎培养的基本培养基和附加物; 附加物： 维生素类：除常用的VB1、VB6、烟酸外，还有生物素、泛酸钙、VC 氨基酸类：除甘氨酸外，还有谷氨酸、天冬氨酸、谷氨酸胺、天冬酰胺 核酸及其水解物：腺嘌呤（ADE）、胞嘧啶、尿嘧啶、鸟嘧啶、水解酪蛋 白，酵母提取物、椰乳、麦芽提取物等 植物激素：除生长素、细胞分裂素外，还有赤霉素;7.2.3 离体胚培养的技术关键;（一） 培养基渗透压对胚性发育的作用 培养基渗透压，对幼胚发育的重要性，与其他器官培养一样。因为幼胚在自然条件下赖以生存的是无定形的液体胚乳，具有较高的渗透压，人工培养基中要创造高渗透压的条件，渗透压的调节主要依赖于糖，糖在胚培养中具有三个方面作用：调节渗透压、作为碳源和能源和防止幼胚的早熟萌发。;（1）幼胚早熟萌发的概念 在含有无机盐、有机物和蔗糖的培养基上，离体培养的幼胚越过正常胚胎发育阶段，在未达到生理和形态成熟的情况下，萌发长成幼苗，称早熟萌发。早熟萌发成的幼苗往往畸形、细弱，甚至不能存活。所以幼胚培养中，防止早熟萌发是非常重要的。;（2）防止幼胚早熟萌发的方法 ①提高培养基渗透压。胚龄越小要求的渗透压（糖浓度）越高，高糖浓度控制幼胚早熟萌发的效果早已被证实。下述实例阐明不同胚龄对糖浓度的要求。 ②提高无机盐浓度。提高无机盐浓度也是为了提高培养基渗透压。可加入适量的NaCl以提高渗透压，浓度一般为0．2％－0．4％，超过0．8％对胚有毒害作用。 ③加人甘露醇提高渗透压。甘露醇的浓度为1．l％－5．5％，以部分地代替蔗糖，使幼胚在等渗条件下继续胚性发育。;（二） 培养基酸碱度对胚性发育的影响;(三) 环境条件对胚性发育的影响;棉花：胚先在黑暗中培养，然后转人光照下培养，子叶的叶绿素生成很慢；而转人弱