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　　青光眼实验模型和损害的论文 【摘要】 青光眼实验模型有助于阐述青光眼的病因学和病理学并发展新的更为有效的治疗方法。本文主要介绍近年来常用的青光眼实验模型及损害评估技术的优势和限制。 【关键词】 青光眼;实验模型;损害评估 青光眼是以视神经萎缩和视野从外周向中央渐进性缺损为特征的神经退行性疾病，发病隐匿，是全球第二致盲眼病，确切发病机制尚不清楚。青光眼的眼内病变主要包括三个方面：(1)房水流出受阻，小梁网和巩膜色素层流出通道形态学和生化的改变，眼内压(intraocular pressure, iop)的增高;(2)视神经乳头(optic nerve head, onh)特异性的变化包括视网膜神经纤维的缺失，筛板压缩变薄、弓形后移、筛孔延长、细胞外基质改变(胶原蛋白、弹性蛋白、基膜连接蛋白、葡糖胺聚糖等)和神经胶质组织改变(星型胶质细胞活化、细胞外间质重构);(3)视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells，rgcs)渐进性的凋亡。 　　青光眼实验模型是研究青光眼生理、病理、药理等方面的主要手段，目前常用的是动物模型和组织细胞培养模型。 　　1 青光眼实验模型 　　1.1 动物实验模型 　　青光眼动物实验模型有助于阐述青光眼的病因学和病理学并发展新的更为有效的治疗方法。最理想的动物实验模型是猴子或猩猩，因为它们的筛板和人类最为接近，但基于社会伦理道德和费用方面的考虑，应用有所限制。.其次是啮齿类，大鼠和小鼠的前房角结构和灵长类很相似，小梁网由小梁细胞覆盖的小梁纤维交织成网状并有真正的schlemm管。小鼠房水动力学和人眼极为相似。不同的是啮齿类没有灵长类视神经乳头处具有的筛板，包括围绕神经节细胞纤维束的筛状板。但是，小鼠和大鼠视神经乳头的细胞层更广阔，星形胶质细胞层板状延伸与神经纤维轴突相互交错。此外，大鼠的视神经乳头有稀松垂直走向的小梁，内含胶原、弹力蛋白、层粘连蛋白和蛋白聚糖。这些优势使啮齿类动物模型成为研究青光眼常用的工具。 　　目前使用的啮齿类动物模型主要有(1)常压模型：玻璃体内注射兴奋性氨基酸、内皮素，视神经损伤、视网膜缺血——再灌注模型;(2)压力模型：自发性高眼压模型、持续光照模型、高渗盐水模型、激光光凝小梁网模型、巩膜静脉烧灼模型、巩膜静脉结扎模型、透明质酸前房注射、微球前房注射。urcola等[1]报道大鼠前房每周注射含有或不含羟丙基甲基纤维素(hydroxypropyl methyl cellulose，hpmc)的乳胶微球可导致眼压增高至少持续30周。(3)转基因模型：利用病毒载体使人myoc突变株在小鼠眼内过度表达，导致iop显著增加[2]。 　　1.2 组织细胞培养模型 　　组织培养和单细胞类型培养是快速比较不同药物治疗效果的工具，并允许直接调控细胞微环境。常用的组织细胞培养模型有：原始视网膜细胞混合培养;纯化rgcs培养;rgcs转染;视网膜移植培养;神经胶质细胞和其他支持细胞培养。通过细胞培养可以：分离和分选纯化细胞确定不同类型细胞的作用;遗传物质转染以过度表达或敲除某种特定基因;细胞内钙离子浓度、活性氧浓度的荧光成像，线粒体膜电位，细胞酸碱度和其他细胞生理学的测量。 　　2 青光眼损害的评估 　　适当的精确的青光眼损害评估技术和工具是研究不可或缺的，包括iop测量、rgcs和视神经的功能形态学评估等。 　　2.1 iop测量 　　高眼压是青光眼主要致病因素，许多动物模型的构建都要涉及iop测量。啮齿类动物眼压测量根据是否穿刺角膜分为创伤性和非创伤性两种。创伤性测量包括微管插入法(microcannulation)和非伺服微液吸管系统(servonull micropipette system)。非创伤性测量包括tonopen笔式眼压计，气动式眼压计(pneumotonometer)，goldmann平压式眼压计，schiotz压陷式眼压计和tonolab反弹式眼压计。最常用是tonopen笔式眼压计，可测量清醒大鼠和小鼠的眼内压，优点是非创伤性和对角膜很柔和，重复测量不会造成任何不利视觉或全身性的影响。气动式眼压计适用于麻醉小鼠，优点是探头可用显微操纵器精细控制。goldmann平压式眼压计是临床测量iop的标准设备，具有与tonopen相同的优点但昂贵不轻便并依赖操作者经验。schiotz式压陷眼压计测量方法简单但操作前动物必须麻醉，影响了重复测量。tonolab反弹眼压计获得的数据与微管插入法获得的实际iop更为接近，可用于清醒小鼠无需角膜局部麻醉，操作简便，对操作者没有太多的经验要求。 　　2.2 rgcs的形态学评估 　　视网膜全层切片或视网膜铺片结合组织化学技术可将所有类型的细胞非特异性染色(如甲酚紫)或选择性的标记rgcs(逆行性标记或rgcs