生物化学第七的章.ppt

第七章 核酸的生物合成;主要内容 第一节 DNA的生物合成 第二节 RNA的生物合成 第三节 基因工程简介;第一节 DNA的生物合成;??核苷酸;DNA单链的延伸 5’ 3’ 端; ;DNA的生物合成;一. DNA 的 复 制;DNA复制;2.半保留复制的实验证据:;Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.;二、 DNA复制的酶学;n1d ATP;DNA聚合酶;DNA聚合酶;（一）DNA聚合酶的活性; 5′至3′的聚合活性（ 5′→ 3′ ） ;;3→5核酸外切;DNA聚合酶的校对功能;5→3核酸外切;合成RNA引物，又叫引物合成酶、引发酶。; 3. DNA连结酶 (DNA ligase); 4. 使DNA双螺旋解开的酶和蛋白质;单链结合蛋白(SSBP)： 与解链后的DNA单链结合，阻止其再次形成双螺旋。大肠杆菌SSB为177 aa多肽，以四聚体形式存在，与32个bp DNA区相结合，结合后的DNA 分子僵硬，不易弯曲，有利于单链DNA分子的稳定，避免核酸酶进攻；同时降低了Tm值，进一步促进DNA的解链。;旋转酶(gyrase,untwisting protein)： 催化DNA的拓扑连环数发生变化。 可分为拓扑异构酶Ⅰ和拓扑异构酶Ⅱ。 Ⅰ型酶可减少负超螺旋；Ⅱ型酶可引入负超螺旋（此时需要ATP提供能量）。具有内切酶和连接酶活力，参与DNA复制前双螺旋的松弛及复制后超螺旋的再恢复。?;三、DNA的复制过程; 复制从特定的位点开始，这一位置叫复制原点。; 复制过程的调控主要取决于复制启动的频率，而DNA延长的速度大体上是恒定的。由于真核生物在多位点上启动复制，所以尽管其DNA比原核生物DNA大得多，但复制的总速度反而比原核生物快。 ; 1. DNA复制的起点 原核生物从一个固定的起始点开始，同时向两个方向进行的，称为双向复制; 2. 复制眼的形成;复制眼的结构：?; 2.复制叉的形成 复制叉----复制开始后由于DNA双链解开，在两股单链上进行复制，形成在显微镜下可看到的叉状结构。 ;3. 起始的过程;复制叉的推进; 另一条链延伸的方向与复制叉前进的方向相反，它显然不能被连续合成，需要复制叉推进了一定的长度，有了一段DNA单链后，才能以此为模板合成一个片段。因此这条新链的合成是不连续的，而且总晚于先导链，所以称为随后链。; 这种前导链连续合成，随后链断续合成的方式，称为半不连续复制。 随后链中合成的多个DNA片段，称为冈崎片段。冈崎片段的长度原核细胞中约1000~2000个核苷酸，真核细胞中约100~200个核苷酸。?;半不连续复制;DNA聚合酶;4.复制的结束;复制的终止没有特殊的信号;DNA复制的忠实性;四、逆 转 录 作 用;五 DNA的损伤与修复;1. DNA损伤的原因; 2. 修复;DNA紫外线损伤的光裂合酶修复;(2) 切除修复 该类修复是指在一系列酶的作用下，将DNA分子中受损伤的部分切除，并以完整的那一条链为模板，合成出新的被切去的部分，然后使损伤的DNA恢复正常结构的过程。切除修复系统可对多种损伤起修复作用。切除修复有核苷酸切除修复（nucleotide excision repair, NER）和碱基切除修复（base excision repair, BER）两种。 ;(2) 切除修复 修复机制: 其过程是：切→补→切→缝 由专一性核酸内切酶催化，在离损伤处附近切断 由DNA聚合酶在断口处进行DNA合成 由5′核酸外切酶将损伤部位切掉 由连接酶将新合成的DNA链与原来的链连接 ;(3) SOS修复 细胞在紧急状态下，能诱导产生缺乏校对功能的DNA聚合酶，它能在DNA的损伤部位进行复制，从而避免了死亡，但产生很高的变异率。;(3) SOS修复 ;(4) 重组修复;损伤并未消除，但被“稀释”了。?; DNA分子中的核苷酸序列发生突然而稳定的改变，从而导致DNA的复制以及后来的转录和翻译产物随之发生变化，表现出异常的遗传特性，称为DNA的突变。它包括由于DNA损伤和错配得不到修复而引起的突变，以及由于不同DNA分子之间的交换而引起的遗传重组。; 1. 类型;(2)插入(insertion)-DNA链中插入一个或几个碱基对，导致遗传密码阅读框的改变，称为移码突变。 (3)缺失(deletion)-DNA链丢失一个或几个