米曲霉固态发的酵苹果渣与棉粕生产中性蛋白酶的工艺优化研究.pdf

2 2 2 2 2 第 25 卷第 2 期 安 　徽 　工 　程 　科 　技 　学 　院 　学 　报 Vol. 25. No. 2 2010 年 6 月 Journal of Anhui University of Technology and Science J un. ,2010 文章编号 :1672 2477 (2010) 02 0018 05 2 米曲霉固态发酵苹果渣与 棉粕生产中性蛋白酶的工艺优化研究 1 1 2 2 2 丁行勇 ,高庆华 ,葛 　飞 (1. 塔里木大学 生2命科学院 , 新疆 阿克苏 　271018 ;2. 安徽工程大学 生物与化学工程学院 ,安徽 芜湖 　241000) 摘要 :为降低中性蛋白酶的生产成本 ,以苹果渣与棉粕为原料 ,采用响应面法对其生产工艺进行了优化. 实验 结果表明 ,培养基中棉粕与苹果渣的最佳质量比为 6 ∶4 ,培养基初始含水量 、(N H4 ) 2 SO4 与 KH2 PO4 对产酶 影响显著 ,其最佳质量分数分别为 62. 19 %、2. 56 % 与 0. 10 % . ZnSO4 与 MgCl2 是非显著性因素 ,其最适质 量分数分别为 0. 10 % 与 0. 05 %. 采用上述培养基于 30 ℃恒温培养 24 h ,干曲蛋白酶活力可达到 4096. 9 U/ g ,比优化前提高了 54. 7 % ,与采用豆粕与麸皮为原料时的产酶水平相当. 关 　键 　词 :苹果渣 ;棉粕 ;蛋白酶 ;固态发酵 ;响应面法 中图分类号 :Q939. 5 　　　　文献标识码 :A 蛋白酶广泛应用于饲料工业 、洗涤剂、制革脱毛、生丝脱胶 、有机合成、酒类澄清 、明胶及蛋白胨生产、 肉质嫩化 、医药治疗等领域 ,其产值约占酶制剂工业总产值的 60 %[ 1 ] . 蛋白酶的生产原料一直以豆粕与麸 皮为主[2 6 ] ,其价格近几年一直攀升 ,使蛋白酶的生产成本大幅度提高 ,因此 ,寻找资源丰富、价格低廉的代 用原料十分必要. 我国棉粕年产量达 400～500 万 t ,其蛋白质含量与豆粕相近. 由于棉粕中存在棉酚 ,限制了其在畜牧 业中的应用 ,导致其价格远低于豆粕[7 ] . 因此 ,以棉粕作为生产蛋白酶的原料 ,有助于降低生产成本 ,开始 受到重视[8 ] . 然而 ,人们对生产蛋白酶的代用碳源研究较少. 苹果渣是苹果经破碎压榨提汁后的剩余物 ,主要由果皮 、果核和残余果肉组成 ,含有可溶性糖 、维生 素、矿物质及纤维素等丰富的营养物质. 我国苹果渣产量巨大 ,每年高达 100 多万 t . 但其中仅少量 (20 %～ 30 %) 得以利用 ,而绝大部分 (70 %～80 %) 因无法进行综合利用而废弃[9 ] ,因此 ,苹果渣的综合利用问题一 直备受关注. 目前 ,以苹果渣为原料生产果胶酶、木聚糖酶、纤维素酶、甘露聚糖酶等酶制剂的研究已广泛 展开[ 10 12 ] ,但尚无用于生产蛋白酶的报道. 本文采用米曲霉对苹果渣与棉粕进行固态发酵生产中性蛋白 酶 ,并采用响应面法对其生产条件进行优化 ,以降低生产成本. 1 　材料与方法 1. 1 　菌种与试剂 米曲霉 ( A s pergill us ory z ae SN 1) ,安徽工程大学生化实验