精子与慢病毒的共孵育条件的优化以及转基因猪的制备_蔡伟光.pdf

中国农业科学 2013,46(9):1903-1914 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2013.09.018 精子与慢病毒共孵育条件的优化以及转基因猪的制备 蔡伟光, 习欠云, 肖 敏, 关立增, 孟繁明, 束 刚, 朱晓彤, 江青艳, 吴珍芳, 张永亮 （华南农业大学动物科学学院/广东省农业动物基因组与分子育种重点实验室，广州 510642） 摘要：【目的】探索慢病毒与精子共孵育的方法，并制备转基因猪。【方法】采用正交试验分析精子密度、病 毒量、精子与慢病毒共孵育时间、精子与慢病毒共孵育温度对精子活力的影响，采用 PCR 和 Southern blotting 检测转基因。【结果】①优化慢病毒与精子共孵育条件为：100 μL 慢病毒原液（5×105cfu）与 1.0×107 个/mL 精 子在 17℃下孵育 30 min；②与病毒孵育后的精子（109 个/mL）给母猪人工授精时，经 PCR 检测 49 头仔猪中有 14 头呈阳性；③Southern blotting 结果表明，8 头 PCR 阳性仔猪中，4 头融合了外源基因。【结论】优化了精子与 慢病毒共孵育的条件（100 μL 慢病毒原液（5×105cfu）与 1.0×107 个/mL 精子在 17℃下孵育 30 min），成功制备 了转基因猪，并检测有外源基因的融合。 关键词：慢病毒; 精子介导转基因; 转基因猪 Optimization of Incubation of Sperm and Lentivirus and Transgenic Pigs Production CAI Wei-guang, XI Qian-yun, XIAO Min, GUAN Li-zeng, MENG Fan-ming, SHU Gang, ZHU Xiao-tong, JIANG Qing-yan, WU Zhen-fang, ZHANG Yong-liang (College of Animal Science, South China Agricultural University/Guangdong Provincial Key Lab of Agoanimal Genomics and Molecular Breeding, Guangzhou 510642) Abstract: 【Objective】A new method was developed for producing transgenic pig using incubation of lentivirus and sperm. 【Method】Effects of sperm number, amount of lentivirus, incubation time and incubation temperature on sperm activity were assessed by the orthogonality design. PCR and southern blotting were used to analyze the transgene.【Result】The optimized incub