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生物秀—专心做生物【】 易生物—实验室问题解决伙伴【】 微生物学检验基本技术 随着现代医学及相关科学技术的发展，各学科相互交叉和渗透，医学微生物学检验技术已 深入到细胞、分子和基因水平，许多新技术、新方法已在临床微生物实验室得到广泛应用。医 学微生物学实验室的基本任务之一是利用微生物学检验技术，准确、快速检验和鉴定临床标本 中的微生物，并对引起感染的微生物进行耐药性监测，为临床对感染性疾病诊断、治疗、流行 病学调查及研究等提供科学依据。 第一节 微生物形态学检查 细菌形态学检查是细菌检验的重要方法之一，它是细菌分类和鉴定的基础，可根据其形 态、结构和染色反应性等，为进一步鉴定提供参考依据。 一、显微镜检查 由于细菌个体微小，肉眼不能看到，必须借助显微镜的放大才能看到。一般形态和结构可 用光学显微镜观察，其内部的超微结构则需用电子显微镜才能看清楚。常用显微镜有如下几 种。 1．普通光学显微镜 采用自然光或灯光为光源，其波长约为 0.4μm。显微镜的分辨率为波长的二分之一，即 0.2μm，而肉眼可见的最小形象为 0.2mm。故用油（浸）镜放大 1 000 倍，能将 0.2μm 的微粒放 大成肉眼可见的 0.2mm。普通光学显微镜可用于细菌、放线菌和真菌等的观察。 2．暗视野显微镜 常用于观察不染色微生物形态和运动。在普通显微镜安装暗视野聚光器后，光线不能从中 间直接透入，视野呈暗色，当标本接受从聚光器边缘斜射光后可发生散射，因此可在暗视野背 景下观察到光亮的微生物如细菌或螺旋体等。 3．相差显微镜 相差显微镜利用相差板的光珊作用，改变直射光的光位相和振幅，将光相的差异转换为光 强度差。在相差显微镜下，当光线透过不染色标本时，由于标本不同部位的密度不一致而引起 光相的差异，可观察到微生物形态、内部结构和运动方式等。 4．荧光显微镜 荧光显微镜与普通光学显微镜基本相同，主要区别在于光源、滤光片和聚光器。目前大多 数使用的是落射光装置，常用高压汞灯作为光源，可发出紫外光或蓝紫光。滤光片有激发滤光 片和吸收滤光片二种。用蓝光的荧光显微镜除可用一般明视野聚光器外，也可用暗视野聚光 器，以加强荧光与背景的对比。本法适用于对荧光色素染色或与荧光抗体结合的细菌的检测或 鉴定。 5．电子显微镜 用电子流作为光源，波长与可见光相比差几万倍，大大提高了分辨力，并用磁性电圈作为 光学放大系统，放大倍数可达数万倍或几十万倍，常用于病毒颗粒和细菌超微结构的观察。 二、不染色标本检查 不染色标本一般可用于观察细菌形态、动力及运动情况。细菌未染色时无色透明，在显微 镜下主要靠细菌的折光率与周围环境的不同来进行观察。有鞭毛的细菌运动活泼，无鞭毛的细 菌则呈不规则布朗运动。梅毒苍白密螺旋体、钩端螺旋体、弯曲杆菌等的活菌各有特征鲜明的 形态和运动方式，具有诊断意义。常用的方法有压滴法、悬滴法和毛细管法等。 1．悬滴法 1 生物秀论坛——学术交流、资源共享、互助社区 /bbs 生物秀—专心做生物【】 易生物—实验室问题解决伙伴【】 在洁净凹玻片的凹孔四周涂上凡士林，用接种环取一环菌悬液放在盖玻片中央，再将凹玻片 的凹孔对准盖玻片中央的液滴并盖上，然后迅速翻转，轻压盖玻片，使其与凹孔边缘的凡士林 粘紧封闭后置高倍镜下（或暗视野）观察。 2．压滴法 用接种环取一环菌悬液置于洁净玻片的中央，在菌悬液上轻轻盖上一盖玻片，注意避免产生 气泡并防止菌悬液外溢，静止数秒钟后置高倍镜下明视野（或暗视野）观察。 3．毛细管法 主要用于厌养菌动力的检查。通常选用 60~70mm 长。0.5~1.0mm 孔径的毛细管虹吸厌养菌 悬液后，用火焰将毛细管两端熔封。并用塑胶纸将毛细管固定在载玻片上，置高倍镜下暗视野 观察。 三、染色标本检查 细菌标本经染色后，由于细菌与周围环境间在颜色上形成鲜明对比，故在普通光学显微镜 下可清楚地观察到细菌的形态特征（如细菌的大小、形状、排列等）和某些特殊结构（如荚 膜、