HPLC法同时测定壮骨关节丸中3种有效成分的含量.docVIP

　　HPLC法同时测定壮骨关节丸中3种有效成分的含量 作者：杨静,谭沛,潘桂湘,代志,郭锦明 【摘要】 目的 建立同时测定壮骨关节丸中淫羊藿苷、补骨脂素和异补骨脂素含量的HPLC方法。方法 采用Zorbax SBC18 (4.6 mm×150 mm, 5 μm)色谱柱；流动相：乙腈0.05%甲酸水溶液（梯度洗脱）；检测波长：0→8 min为270 nm，8→15 min为246 nm；流速：1.0 mL/min；柱温为35 ℃。结果 淫羊藿苷、补骨脂素、异补骨脂素分别在0.0223～0.713 μg（r=0.9997）、0.0272～0.869 μg （r=0.9998）、0.0213～0.681 μg（r=0.9998）范围内与峰面积呈良好的线性关系；平均回收率分别为101.1% (RSD=3.27%)、97.66%(RSD=2.46%)、99.65%(RSD=2.13%)。结论 该方法简便可行、重现性好、可作为壮骨关节丸的质量控制方法。 【关键词】 壮骨关节丸；淫羊藿苷；补骨脂素；异补骨脂素;梯度洗脱 　　Abstract:Objective To establish an HPLC-VETTLER TOLEDO AX205（瑞士）十万分之一天平；BP121S万分之一天平（德国塞多利斯公司）；KQ250E型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司，频率40 kHz，功率250 m×150 mm, 5 μm)； 流动相：A为乙腈，B为0.05%甲酸水溶液，梯度洗脱 （0 min, 30% A; 10 min, 34% A; 15 min, 65% A）； 检测波长： 0→8 min为270 nm， 8→15 min为246 nm；流速为1.0 mL/min；柱温为35 ℃；进样量：10 μL。在此色谱条件下各成分分离良好，缺补骨脂和淫羊藿的阴性制剂对化合物的测定无干扰。对照品及供试品溶液色谱图见图1。 　　2.2 对照品贮备液的制备 精密称取淫羊藿苷7.13 mg、补骨脂素8.69 mg、异补骨脂素6.81 mg，置同一10 mL量瓶中，加入8 mL甲醇超声溶解并定容至刻度，混匀，得混合对照品贮备液。 　　2.3 供试品溶液的制备 取壮骨关节丸，研细，取约1.5 g，精密称定，置25 mL容量瓶中，加甲醇25 mL，超声提取20 min，放至室温，摇匀，过0.45 μm微孔滤膜，取续滤液，即得。 　　2.4 阴性供试品溶液的制备 取缺补骨脂、淫羊藿的阴性样品，按“2.3”项下供试品溶液制备方法制备缺补骨脂、淫羊藿的阴性供试品溶液。 　　2.5 线性关系考察 　　精密移取混合对照品贮备液1.0 mL至10 mL量瓶中，加入甲醇定容至刻度，摇匀。采用逐级稀释法配制淫羊藿苷质量浓度为2.228、4.456、8.913、17.83、36.65、71.30 μg/mL；补骨脂素质量浓度为2.716、5.431、10.86、21.73、43.45、86.90 μg/mL；异补骨脂素质量浓度为2.128、4.256、8.513、17.03、34.05、68.10 μg/mL的系列混合对照品溶液。在“2.1”项的色谱条件下进样10 μL，测定峰面积。以各对照品浓度为横坐标（X），峰面积为纵坐标（Y）作线性回归，结果见表1。表1 淫羊藿苷、补骨脂素、异补骨脂素的回归方程及线性范围（略） 　　2.6 精密度试验 取同一混合对照品溶液，连续进样6次，测定峰面积。淫羊藿苷、补骨脂素和异补骨脂素峰RSD分别为0.38%、0.40%、0.41%，结果表明仪器的精密度良好。 　　2.7 稳定性试验 取同一供试品溶液分别于0、2、4、6、8、10、12 h 进样10 μL，测定峰面积。淫羊藿苷、补骨脂素和异补骨脂素峰RSD分别为0.18%、0.29%、 0.31%,表明供试品溶液在12 h 内基本稳定。 　　2.8 重现性试验 取同一批号壮骨关节丸粉末（0707241），精密称定6份，按“2.3”项制备供试品溶液，依法测定， 计算 含量。淫羊藿苷、补骨脂素和异补骨脂素含量分别为0.1863 mg/g（RSD=3.32%）、0.2903 mg/g（RSD=2.35%）和0.2293 mg/g（RSD=2.24%），结果表明方法的重复性良好。 　　2.9 回收率试验 取同一批号壮骨关节丸粉末（0707241），取约0.8 g，精密称定6份，分别置25 mL量瓶中，精密加入0.221 mg/mL淫羊藿苷对照品溶液0.7 mL，0.325 mg/mL补骨脂素对照品溶液0.7 mL，0.438 mg/mL异补骨脂素对照品溶液0.4 mL，按“2.3”项制备供试品溶液，依法测定，计算回收率。淫羊藿苷、补骨脂素和异补骨脂素平均