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　　仙人掌对辐射小鼠bcl 作者：梁亦龙 舒坤贤 何伟 韦平 查毅 张燕红 韦衍颜 胡娟 【摘要】 　　目的测定仙人掌对辐射小鼠bcl-2与p53基因表达影响。方法以UVB辐照制备损伤模型，预先给予仙人掌，以RT-PCR测定仙人掌对辐射小鼠bcl-2与p53基因表达量的影响。结果仙人掌对辐射小鼠bcl-2的基因表达降低有保护作用，使辐射后p53基因表达降低。结论仙人掌具有一定的防辐射作用。其抗辐射作用与其调控细胞bc1-2与p53基因有关。 【关键词】 仙人掌 辐射 bcl-2基因 p53基因 　　Abstract:ObjectiveTo study the effects of genistEin on bone marroal and irradiated mice.MethodsThe irradiation damage model of the mice caused by UVB RNA gene expression ined ice.ConclusionThe radioprotective effect of Opuntia is related to regulation of cell apoptosis and bc1-2 and p53 gene expression. 　　Key l生理盐水灌胃,1次/d；辐射对照组、仙人掌小剂量组和仙人掌大剂量组，每组8只动物。小剂量组和大剂量组的小鼠分别以〔2.5 g/(kg·d)，10.0 g/(kg·d)〕 将仙人掌粉按比例混入基础饲料中，其他两组以等量蒸馏水灌胃，到第7天时，两个剂量组和辐射对照组的小鼠给予全身中波紫外射线照射(UVB，270 nm)，4 h/d，持续7 d后，在无菌条件下分别取股骨骨髓，并制成细胞悬液进行检测。 　　1.3 RT-PCR检测相关基因表达的变化 　　1.3.1 RNA的提取RNA提取和鉴定采用Trizol提取液，按照试剂盒说明书提取骨髓细胞RNA。采用紫外分光光度计, 测定样品在波长260 nm和280 nm的紫外吸收值。根据1 OD260相当于40 g/ml RNA确定RNA的量,根据OD260/OD280 比值判定RNA样品的纯度(OD值为1.8～2.1为宜)。 　　1.3.2 cDNA第一链的合成取一0.5 ml eppendorf管，加入2 μg总RNA， 2 μl oligod(T)，4℃ 8 000 r/min稍离心后，70 ℃水浴5 min，迅速置于冰上冷却，加5×反应缓冲液(M2MLV ) 5 μl，dNTP(10 mmol/l) 3 μl，M2MLV反转录酶( 200 U /μl) 1 μl，再加无酶水至总体积为25 μl(均在冰上进行)。稍离心后，42℃水浴60 min。所得的产物即为cDNA，置于-20℃保存。 　　1.3.3 引物设计bcl-2上游引物：5-AGGGGG AAA CAC CAG AAT C-3 ；下游引物为：5-GGT AGC GAC GAG AGA AGT CA-3，长度为492 bp；p53上游引物：5-ACCCAGGTCCAGATGAAG-3；下游引物5-GGAGTACGTGCAAGTCACAG-3，扩增片段长度为217 bp；β-actin为内参引物，上游引物：5-CACTGT GCC CAT CTA TGA GGG TTA C-3 ；下游引物为：5-CAT TGC CGA TAG TGA TGA CCTGAC C-3，长度为275 bp。引物由上海基康公司合成。 　　1.3.4 聚合酶链式反应( PCR)扩增PCR扩增p53，bcl-2 cDNA反应体系：10×Buffer 2.5 μl，dNTP 2.5 μl，引物各0.5 μl，Taq DNA酶0.05 μl，加ddH2O至总体积25 μl。PCR反应程序：95℃ 90 s，94℃ 40 s 56℃ 40 s(bcl-2)与58℃ 40 s(β-actin)，72℃ 40 s，×30，72℃ 7 min，40℃ 结束；p53按下述条件进行PCR扩增：94℃ 30 s，53℃ 30 s，72℃ 30 s，×28，72℃ 7 min结束。取RT-PCR反应产物8 μl，进行1.5%琼脂糖凝胶电泳，用凝胶扫描成像分析仪处理系统分析结果。测定bcl-2/β-actin 与p53/β-actin 比值，即为相对的bcl-2与p53基因mRNA 含量。 　　1.4 统计学方法统计学数据用±s表示。采用SPSS 12.0软件处理。 　　 2 结果 　　实验结果显示, 紫外线处理各组小鼠骨髓细胞bcl-2与p53 mRNA表达不同，紫外处理各组bcl-2 mRNA的表达，对照组的表达最高，模型组最低，喂食仙人掌后，表