低强度脉冲超声波影响兔骨髓基质干细胞与β.docVIP

　　低强度脉冲超声波影响兔骨髓基质干细胞与β .L.编辑。 作者：梁伟，苟三怀，欧阳跃平，刘岩，严力生，陈洪勋 【摘要】 ［目的］ 探讨低强度脉冲超声波(LIPUS)影响β-磷酸三钙(β-TCP)与兔骨髓基质干细胞(BMSCs)复合体修复兔桡骨骨缺损的效果。［方法］ 从兔股骨粗隆部抽取骨髓，体外培养扩增，取第3代BMSCs接种于β-TCP培养1周，分为两组，一组予以LIPUS作用，另一组作为对照。以20只成年新西兰兔为研究对象，制作双侧桡骨远端骨缺损模型。一侧桡骨骨缺损处植入LIPUS作用过的细胞支架复合体做为实验组，另一侧植入LIPUS未作用过的细胞支架复合体做为对照组。分别于术后4周、8周处死新西兰兔，运用 计算 机图像分析X线片上骨痂的灰度密度，行组织学切片检查骨痂生长情况。［结果］X线片骨痂灰度密度测量提示实验组骨痂较对照组生长明显增多。组织学切片显示实验组血肿机化、吸收、骨小梁和骨基质形成早于对照组。［结论］在骨缺损修复早期，LIPUS对BMSCs与β-TCP复合体修复兔骨缺损有明显的促进作用；而在骨缺损修复晚期，LIPUS的作用相应减弱。 【关键词】 骨组织工程； 细胞支架复合体； 骨缺损； 低强度脉冲超声波 Abstract: ［Objective］To explore the effect of loarroal cells (BMCs) and β-tricalcium phosphate (β-TCP). ［Method］Bone marroedium to harvest BMCs and the third generation BMCs ade using a 1-mm saature Neulated by LIPUS planted in rabbit radial defects (cell-scaffold plexs ulation as control).All the rabbits age analysis system.［Result］It ental group greore quickly and apparently than that in the control group.At 4 age analysis system.But at 6 ental group shoatoma,the formation of trabeculae and matrix preceded those in the control group.There ore fibroblast,osteoblasts and callus in the experimental group.［Conclusion］Cell-scaffold plex posed ulated by LIPUS can repair bone defect more effectively than that ulation at the early stage of healing,but the effect tend to decrease at the late stage. Key a,USA)：1×10-8 mmol／L地塞米松：（10 mmol／L β-甘油磷酸钠；50 mg／L维生素C）。 立刻生TM低强度脉冲超声波治疗仪，由杭州核新生物医疗技术有限公司提供。超声波强度为40 mHz，脉冲频率为1 kHz，脉冲宽度为200 ms，间隙时间为800 ms。 1.2 实验方法 1.2.1 取材及细胞培养 3%戊巴比妥钠按25 mg／kg浓度对新西兰白兔经耳缘静脉给药麻醉后，取10 ml已肝素化处理的注射器抽取股骨粗隆部骨髓约5 ml。无菌工作台上，用200目滤纱过滤骨髓，1 500 r／min水平离心4 min，将沉淀的细胞重悬于含10%胎牛血清(FBS)低糖DMEM培养基的培养瓶中(25 cm2)，置于恒温二氧化碳细胞培养箱中培养(37℃、5%CO2、100%饱和湿度)。第5 d首次进行半量换液，加入DMEM培养液，此后每周换液2次。待培养皿中细胞融合成单层时，采用酶消化法+机械刮除法进行细胞传代：0.25%胰蛋白酶使贴壁细胞脱壁，将细胞悬液按1∶3的比例接种，继续培养。 1.2.2 制作BMSCs-TCP复合体 将第3代BMSCs以1×106个/孔的密度接种于4块6孔培养板中，每个孔内均加入10 mm×5 mm×5 mm大小的TCP支架和条件培养基后，其中两块培养板应用LIPUS对BMSCs每天作用20 min，作用时间为1周，另两块培养板作为对照组未予作用。在立刻生TM骨科超声治疗仪的治疗头上涂抹耦合胶，并紧贴在实验组培养板底部进行作用。 1.2.3 BMSCs-TCP