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- 2017-05-06 发布于广东
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;第六章 种子的扩大培养;种子扩大培养;是指将处于休眠状态的生产菌种接入试管斜面活化后,再经过摇瓶或扁瓶及种子罐逐级扩大培养,最终获得一定数量和质量的纯种过程。这些纯种培养物称为种子。
;;;;;(二) 种子扩培的目的;(三) 种子的要求:;二、 种子制备(Inoculum development)工艺举例;1、斜面 (谷氨酸生产菌AS1299);2. 一级种子(摇瓶);3. 二级种子(种子罐);种子的质量要求:;(二)青霉素生产(丝状产黄青霉 )的种子制备;1、斜面孢子;2、大米孢子;3、一级种子;种子的质量要求;三、 种子制备的技术概要;;(二)实验室阶段的种子培养 ;2、培养基选择的原则;3、起始接种物的传代问题;孢子制备是种子制备的开始,是发酵生产的一个重要环节。
孢子的质量、数量对以后菌丝的生长、繁殖和发酵产量都有明显的影响。
不同菌种的孢子制备工艺有不同的特点。;一般采用琼脂斜面培养基,培养基中含有一些适合产孢子的营养成分,如麸皮、豌豆浸汁、蛋白胨和一些无机盐等。
碳源和氮源不要太丰富(碳源约为1%,氮源不超过0.5%),干燥和限制营养可直接或间接诱导孢子形成。
放线菌斜面的培养温度大多数为28℃,少数为37℃,培养时间为5~14天。;;菌种接入种子罐有两种方法:;2)霉菌孢子的制备
;3)细菌培养物的制备;(三)生产车间阶段;2、培养基选择的原则;例:柠檬酸发酵;以薯干粉为原料;3、种子罐级数的确定 ;;;;;4)对于生长快的细胞,种子用量的比例少,即需要的接种量少,所以相应的种子罐也少。
如谷氨酸生产中,摇瓶种子接入种子罐于32℃培养7~10h,菌体浓度达到108~109个/ml,即可作为种子接入发酵罐,这称为一级种子罐扩大培养,也可叫作二级发酵。;生长较慢的菌种,如青霉素生产菌,就需要二级种子罐扩大培养,也可称为三级发酵。
一般50m3发酵罐都采取三级发酵。
如果是实验室的中试(5~30L),可以通过直接孢子或菌体接入罐中发酵,即一级发酵。
;4、接种量的确定; 由于种子量多,同时种子液中含有大量体外水解酶类,有利于对基质的利用,并且生产菌迅速占据整个培养环境,则可减少杂菌生长的机会。
但是,如果接种量过多,往往使菌丝生长过快,培养液黏度增加,造成溶解氧不足,而影响产物的合成。;;双种:两个种子罐接种到一个发酵罐中。;5、种龄;6、种子质量的判断:;(四)影响种子质量的因素
1 原材料质量(培养基)
培养基的营养成分应适合种子培养的需要;
生产过程中经常出现种子质量不稳定的现象,其主要原因是原材料质量波动。
起主要作用的是其中无机离子含量不同,如微量元素Mg2+、Cu2+、 Ba2十能刺激孢子的形成。磷含量太多或太少也会影响孢子的质量。
;2 培养条件
(l)温度 温度对多数品种斜面孢子质量有显著的影响。温度高,菌丝过早自溶,效价降低等现象。严格控制。
(2)湿度 影响斜面孢子培养基上孢子的数量和质量。
(3)通气量 足够的通气量可以提高种子质量。;;;第二节 种子质量的控制措施 ;;名词解释:种子的扩大培养、接种量、倒种、双种、种龄
种子扩大培养的目的与要求。
保证种子质量有哪些措施?
种子罐级数与发酵的关系。
思考题:结合具体的产品,谈谈种子质量控制的方法,以及种子质量对发酵的影响?
;;;;;;;
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