高效共生苜蓿根瘤菌的系统发育学比较研究.pdfVIP

增强，光合作用效率提高，使作物获得充分的营养成分，最终提高产量。这些研 究和本次的研究结果一致。联合固氮菌对植物的促生的主要作用不是固氮，而是 存在其它的作用。总之N4的效果比较好，具有推广和应用前景。 。 4．讨论 · ’联合固氮菌菌株的促生效应有待于进一步研究，因为依靠固氮菌株固氮量对 植物的促生效果没有联合固氮菌的促生效果好。 在自然状态下有些固氮菌与植物有着松散的联合，或进入植物成为内生菌， 这就为进一步利用这些固氮生物给植物提供氮素创造了更多的机会。在研究固氮 基因表达和调控的基础上，有针对地进行固氮菌的遗传改造，构建高效的固氮菌 株，以提高固氮效率，减少化肥施用，为作物提供更多的固氮量，必须全面的研 究联合固氮菌的固氮量、促生机理和效应。 研究发现燕麦联合固氮菌的地上和地下的原子百分超不一样，可以说明被固 定的氮素更多的运向燕麦的地上部分，但是对于其中的原因，有待于进一步的研 究。大多认为联合固氮菌的作用是分泌激素，因此，必须进一步研究分泌的数量， 种类和作用机理。 参考文献：略 高效共生苜蓿根瘤菌的系统发育学比较研究 刘杰 (青岛科技大学生物工程与技术系，青岛266042) A基因这两种进化保守分子对4株苜 摘要：本实验主要采用16srRNA基因和lee 蓿高效共生菌株进行系统发育学比较研究。结果表明：对于根瘤菌来说，用这两 种保守基因所构建的系统发育树具有较高的相符性，可以考虑用teeA替代16S rDNA建树对大量未知菌株进行快速系统学鉴定。．4株苜蓿高效共生菌株中 01055、73317、83092菌株在两种系统树当中得到一致性的定位，归属于 16SrDNA系统树中与其它三个菌株的定位一致，而在recA系统树中则归属于 入研究。 、 关键词：高效共生根瘤菌；紫花苜蓿；系统发育；16SrDNA；recA 豆科植物．根瘤菌这一人们共认为最强的共生固氮体系已在全世界得到广泛 的应用，并在我国的农田问耕套种措施、牧草场改良、退耕还林还草、保护生态 环境等工程中也越来越显示出其强大的应用潜力。尤其是“紫花苜蓿”+这种优 良牧草的栽培生产已产生了巨大的经济效益并发挥出明显的生态效益。同时人们 对与苜蓿共生的根瘤菌也进行了广泛地采集、分类与应用研究。在我们前期的工 作中11]。利用土壤自然栽培法对分离自我国西北部地区的野生紫花苜蓿根瘤菌进 行了高效共生菌株的筛选，从中获得了4株高效菌株。本实验主要采用16srRNA 基因和lecA基因这两种进化保守分子对4株高效共生菌株进行系统发育学比较 研究，以期对它们进行较为全面的系统发育学定位。 。 1．材料与方法 1．1实验用菌株 112 4株高效共生菌株Wl、W2、W3、W4为分离纯化纯种，保藏于．70％甘油管 中o 1．2菌株培养及总DNA的提取 供试菌株首先在YMA斜面上28。C活化，然后挑取一环菌接种于5mlYM液 体培养基中，于28％空气摇床培养24．48h，直至对数生长后期获得足够的菌体。 总DNA的提取参考赵斌等小规模快速提取方法【2】o 1．3PCR引物及反应条件 rec 16SrDNA引物序列与反应条件参考文献[310A引物序列为：正向引物：5’ 一GTrTGAAGACTCTCGCACAGAACG 7一TACCGC GCT-3’；反向引物：5 CCTGGTACG TACACTTCA．3’。 recA ℃变性45 1．4 PCR产物检测、回收与测序 PCR产物用1．2％的琼脂糖凝胶(含EB)电泳分离与检测，按照回收试剂盒 (天为时代产品)说明书进行胶回收扩增的目的片段，然后进行克隆测序(克隆 方法参考文献刚)o 1．5序列分析与系统发育树的构建 将克隆