去甲肾上腺素对THP.docVIP

　　去甲肾上腺素对THP 作者:陈光军，郭小芳，肖荣，田智 【摘要】 目的 探讨去甲肾上腺素对人THP-1源性巨噬细胞SR-A1表达的 影响 。 方法 不同浓度的去甲肾上腺素（10pmol/L～10 μmol/L）作用THP-1源性巨噬细胞24h，运用逆转录多聚酶链反应检测其SR-A1 mRNA的表达。P＜0.05）。结论 应激状态的去甲肾上腺素能升高THP-1源性巨噬细胞SR-A1基因的表达。 【关键词】去甲肾上腺素； THP-1源性巨噬细胞； SR-A1 Effects of noradrenaline on SR-A1 expression in human THP-1 macrophage cells 【Abstract】 Objective To investigate the effect of noradrenaline on the expression of SR-A1 in human THP-1 macrophage cells.Methods P＜0.05）.Conclusion Stress concentrations of noradrenalin cause SR-A1 expression increased in human THP-1 macrophage cells. 【Key an THP-1 macrophage cells; SR-A1 应激定义为机体在心理、环境或者物理应激原刺激下，激活下丘脑－垂体－肾上腺轴和交感神经系统导致生理的变化或适应［1～5］。反复的或者慢性应激与急性反应物质能共同促进炎症反应，激活巨噬细胞产生自由基，修饰脂质，转变为泡沫细胞和激活凝血途径形成稳定或者不稳定的斑块。因此从细胞水平探究应激性心理 社会 因素是否参与动脉粥样硬化的过程意义重大。本 研究 以THP-1巨噬细胞为研究对象， 观察去甲肾上腺素对THP-1源性巨噬细胞SR-A1基因表达的影响， 以探究应激性心理社会因素在动脉粥样硬化泡沫细胞形成中的作用。 1 材料与方法 1.1 仪器和试剂 人单核细胞THP-1由 中国 科学 院上海细胞库提供；逆转录多聚酶链反应试剂盒为美国Promega公司产品；Trizol为Invitrogen公司产品；2×Taq PCR MasterMix为北京天为 时代 公司产品；鼠抗人SR-A1多克隆抗体及为Santa Cruz公司产品； SR-A1和GAPDH引物均由上海生物工程公司合成；其他试剂均为进口或国产 分析 纯。 1.2 细胞培养分化与去甲肾上腺素处理 人单核细胞系THP-1细胞（购自中国科学院上海细胞库），使用含10％胎牛血清的RPMI-1640培养基，于37℃、5%CO2的培养箱中培养，每3天传代1次。于传代后第1天收集细胞，以4×106个接种于25cm2培养瓶，每瓶含8ml培养基，再加入8μl 100 μmol/L 佛波酯（Phorbol 12-myristate 13-acetate，PMA）使PMA终浓度为100 nmol/L，37℃、5%CO2的培养箱中培养3天，显微镜下观察显示此时细胞呈贴壁状态，形状不规则并有伪足伸出，证实THP-1细胞已分化为巨噬细胞，此时更换为含去甲肾上腺素的无血清培养液，各组去甲肾上腺素终浓度为：对照组0，1组10 pmol/L，2组100 pmol/L，3组1nmol/L，4组10 nmol/L，5组100 nmol/L，6组1μmol/L，7组10μmol/L，在37℃、5% CO2的培养箱中孵育24h。 1.3 逆转录聚合酶链反应 收集各组THP-1源性巨噬细胞。按Trizol试剂盒（Invitrogen公司）说明书提取细胞总RNA。采用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度法检测RNA的纯度和浓度。取2μg各组细胞总RNA逆转录合成cDNA，再取1μl逆转录产物进行PCR循环。94℃预变性4min，94℃变性1min，退火：GAPDH 60℃ 30s，SR-A1 59℃ 1min，72℃延伸1min，最后72℃延伸10min。循环数：GAPDH 28个循环， SR-A1 34个循环。人GAPDH的引物序列：上游5’-tgtcgctgttgaagtcagag-3’； 下游5’-tcaccatcttccaggagcgag-3’。产物长度为696 bp。人SR-A1的引物序列：上游5’-ctcctgaagtgggaaacgaag-3’； 下游5’-gaggttggcttccatgtctaa-3’。产物长度为183bp。取PCR产物6μl上样于2％琼脂糖凝胶，90V电压，电泳1h后在紫外可见分析装置下拍照。图像采用凝胶成像分析系统获得3-磷酸甘油醛脱氢酶（GAPDH）和目的条带