双缩脲法快速测定蛋白质含量.docVIP

　　双缩脲法快速测定蛋白质含量 【摘要】 　　 研究 了双缩脲法测定蛋白质含量过程中温度及碱性因素对结果的 影响 ，将定量标准曲线固定下来，可达到快速检测的目的。 【关键词】 双缩脲法　蛋白质含量 　　人造血浆是明胶制成的血浆替代品，常用双缩脲法［1］对其蛋白含量定量 分析 。通过实验证明实验室温度对此 方法 结果没有明显影响，而在此方法中双缩脲试剂碱性强度对实验结果影响较大。我们找到了一种合适的碱性强度，作出了稳定的标准曲线，使检测速度大大提高。 　　1 材料与方法 　　1.1 仪器 紫外可见分光光度计(日本岛津，UV160)；分析天平(日本岛津，AEG220G)。 　　1.2 试剂 人造血浆(沈阳贝朗制药有限公司)；柠檬酸C6H8O7·H2O(国药集团化学试剂有限公司，分析纯)；硫酸铜CUSO4·5H2O(鑫科股份合肥 工业 大学化学试剂厂，分析纯)；氢氧化钠NaOH(国药集团化学试剂有限公司，分析纯)；氯化钠(天津市天河化学试剂厂，分析纯)。 　　1.3 溶液配制 　　1.3.1 CUSO4·5H2O溶液 　　取40.0g柠檬酸C6H8O7·H2O和4.0g硫酸铜CUSO4·5H2O加蒸馏水300ml搅拌溶解后定容至500ml。 　　1.3.2 NaOH(2M)溶液 　　取NaOH 40.0g，加蒸馏水300ml搅拌溶解冷却后定容至500ml。 　　1.3.3 NaOH(4M)溶液 　　取NaOH 80.0g，加蒸馏水300ml搅拌溶解冷却后定容至500ml。 　　1.4 试验方法 　　1.4.1 温度对结果的影响 　　 ① 双缩脲溶液制备：取1.3.1溶液50ml加入50ml 1.3.2溶液混匀放置冷却至室温。② 取人造血浆(蛋白含量40.0g/L)0.75ml、1.0ml、1.25ml、1.5ml分别置于20ml容量瓶中，加入双缩脲溶液10ml，用0.9% NaCl溶液定容至刻度，摇匀后在20℃水浴放置10min，用紫外可见分光光度计在520～600mn进行扫描，取最大峰值作为结果。在30℃、40℃重复上述试验，结果见表1、图1。表1 温度对结果的影响（略） 　　1.4.2 碱性因素对结果的 影响 　　① 双缩脲溶液制备：取1.3.2溶液8ml、9ml、10ml、11ml、12ml分别加入1.3.1溶液10ml混匀放置冷却至室温。② 分别取人造血浆(蛋白含量40.0g/L)1.0ml置于20ml容量瓶中，分别加入上述双缩脲溶液10ml，用0.9% NaCl溶液定容至刻度，摇匀后放置10min，用紫外可见分光光度计在520～600mn进行扫描，取最大峰值作为结果。结果见表2、图2。表2 碱性因素对结果的影响（略）注：A为520～600mn最大吸收值。 　　 　　1.4.3 合适的碱性强度 　　重复1.4.2只是把1.3.2溶液换成1.3.3溶液，所得结果见表3、图3。表3 碱性强度（略） 　　1.4.4 标准曲线的确定 　　以确定蛋白含量人造血浆(蛋白含量40.0g/L)为标准品，取0.75ml、1.0ml、1.25ml、1.5ml做标准曲线，结果见图4。 　　2 结果 　　2.1 温度对结果的影响 显然实验室温度对此 方法 的结果没有明显影响。 　　2.2 碱性因素对结果的影响 实验结果显示碱性强度对此方法影响较大。 　　2.3 合适的碱性强度 实验结果表明当NaOH溶液浓度在4M左右时碱性强度微弱的变化对此方法结果无影响。 　　2.4 标准曲线的确定 　　3 小结 利用本 研究 方法可以提高蛋白质含量测定的速度，因为在检测过程中省去了确定标准曲线的时间。本方法对蛋白质类药品生产过程中的含量控制具有实际的意义。 【 参考