反相高效液相色谱法测定不同地区不同采集期茜草中茜草素的含量.docVIP

　　反相高效液相色谱法测定不同地区不同采集期茜草中茜草素的含量 【摘要】 　　目的采用反相高效液相色谱(RPHPLC)法测定不同地区、不同采集期茜草中大叶茜草素的含量。方法色谱柱Lichrosorb C18柱(150 mm×4.6 mm，5 μm)； 紫外检测波长250 nm；流动相为甲醇-0.1%磷酸水溶液（85∶15），流速0.8 ml·min-1，柱温为35℃。结果大叶茜草素在0.021～0.105 μg具有良好的线性关系，r=0.999 5，平均回收率为99.82％，RSD为0.85％(n=5)。结论该方法简便快捷、精密度高、结果准确。 【关键词】 茜草；大叶茜草素；反相高效液相色谱 　　Abstract：ObjectiveTo develop an RP-HPLC method for determination of the contents of mcilugin in radixrubiae of the different resources and different collect times．MethodsThe extracts m×4.6 mm，5 μm) column ethanol-0.1%phosphoric acid (85:15) as mobile phase．The flol·min-1．The detection ．Column temperture ethod ethod is simple,rapid and accurate． 　　Key cilugin）对照品 ( 中国 药品生物制品检定所)，甲醇 (色谱纯)，磷酸(分析纯)。茜草(不同采集期夏季、秋季；不同地区采自安徽、江苏、山东)。 　　2 方法与结果 　　2.1 色谱条件色谱柱Lichrosorb C18柱(150 mm ×4.6 mm，5 μm)； 紫外检测波长250 nm；流动相为甲醇-0.1%磷酸水溶液（85∶15），流速0.8 ml·min-1，柱温为35℃。 　　2.2 对照品溶液的制备 　　精密称取大叶茜草素对照品 2.1 mg，用甲醇溶解，定容于 100 ml容量瓶中，制得浓度为 0.021 mg·ml-1的标准储备液。 　　2.3 供试液的制备 　　取样品粉末 0.4 g，精密称定，置50 ml具塞锥形瓶中，加入甲醇25 ml，称重，浸泡过夜，超声处理30 min，放冷，加甲醇补足失重，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液。 　　2.4 线性关系的考察 　　分别精密吸取对照品储备液1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 μl，按色谱条件测定峰面积积分值，以浓度为纵坐标，峰面积为横坐标，绘制标准吸收曲线，并用最小二乘法求回归方程，结果见表1，得回归方程为C=1.98×10-5A-2.138 8，相关系数r=0.999 5。结果表明，大叶茜草素浓度与峰面积在0.021～0.105 μg内呈良好的线性关系(其中A表示峰面积)。表1 对照品峰面积测定值（略）表2 不同产地、不同采集期茜草中茜草素的含量（略） 　　2.5 精密度实验 　　精密吸取同一份供试液，连续进样 5次，20 μl/次，峰面积的RSD为 0.68％，说明仪器和色谱条件均具有良好的精密度。 　　2.6 重现性实验 　　精密称取山东(秋季)茜草样品5份，按样品制备方法制备供试品，进样20 μl，测定峰面积， 计算 的峰面积RSD=1.20％(n=5)，结果显示，该方法具有较好的重现性。 　　2.7 稳定性实验 　　在室温条件下，将样品按测定方法处理后，分别在 1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0 h每次进样 20 μl，RSD=0.65％(n=5)。结果表明，该溶液在 6 h内的含量基本保持不变。 　　2.8 回收率实验 　　回收实验采用加样回收法进行测定 ，取已知大叶茜草素含量的茜草样品5份，精密称定，分别精密加入大叶茜草对照品230 μg，按照供试品溶液制备方法制备，依法测定，测定峰面积计算回收率，结果平均回收率为99.82%，RSD=0.85％。 　　2.9 样品测定 　　收集不同产地、不同采集期的茜草，测定不同产地、不同采集期药材中大叶茜草素的含量。结果见表2。 　　3 讨论 不同产地茜草中大叶茜草素的含量不同，同一产地不同采集期含量也不同，实验证明在相同产地，秋季采集的茜草中大叶茜草素含量较高；不同产地，在山东秋季采集的茜草中大叶茜草素含量最高，可为临床安全用药提供 参考 。 【参考