原花青素对CIA大鼠足爪组织中NFκB-p65蛋白和血清中某些促炎性细胞因子表达的影响.docVIP

　　原花青素对CIA大鼠足爪组织中NFκB/p65蛋白和血清中某些促炎性细胞因子表达的影响 作者：林观平，刘国玲，丁伟斌，梁统，周克元 【摘要】 目的 研究 原花青素对Ⅱ型胶原诱导的类风湿性关节炎（CIA）大鼠足爪组织中核转录因子NFκB/p65蛋白表达的抑制作用和血清中炎性细胞因子IL1β、TNFα等水平的 影响 。 方法 建立Ⅱ型胶原诱导的CIA大鼠模型，免疫组化法检测足爪组织中NFκB/p65蛋白的表达，ELISA法检测CIA大鼠血清中IL1β和TNFα的含量。结果 原花青素能剂量依赖性地下调NFκB/p65蛋白的表达，降低CIA大鼠血清中TNFα和IL1β的水平。结论 原花青素对CIA大鼠炎症的抑制作用可能与其下调NFκB/p65蛋白表达、降低促炎性细胞因子TNFα、IL1β的水平有关。 【关键词】 原花青素；Ⅱ型胶原诱导的类风湿性关节炎；NFκB/p65；TNFα；IL1β 　　Abstract:Objective To investigate the inhibitory effect of proanthocyanidins on the expression of NFκB/p65 protEin in the tissue of Type Ⅱ collageninduced arthritis (CIA) rat′s pas.Methods CIA model in SD rats munohistochemistry. The contents of TNFαand IL1β in CIA rats serum easured s.Conclusion The antiinflammatory mechanisms of proanthocyanidins may be related to decreasing the protein expression of NF κB/p65 and suppressing proinflammatory factors, i.e., TNFα and IL1β in CIA rats. 　　Key atoid arthritis，RA）是一种自身免疫性疾病，以慢性、对称性、多滑膜关节炎和关节外病变为主要临床表现［1］。其发病机理尚不完全明确，传统 治疗 RA的药物虽能起到抑制RA的作用，但副作用大，因此寻找安全有效的治疗RA的药物是 目前 RA研究的重点。原花青素是一大类多酚类化合物的总称，由不同数量的儿茶素或表儿茶素组成，具有抗过敏、抗肿瘤、改善心血管、抗炎等多方面的作用［2］。为进一步探讨原花青素的抗炎作用机制，本实验以CIA大鼠为炎症模型，研究原花青素对CIA大鼠NFκB/p65蛋白表达及血清中促炎性细胞因子TNFα、IL1β含量的影响。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 　　原花青素(proanthocyanidins)（南京学子医化研发中心，纯度95%），弗氏完全佐剂、Ⅱ型胶原、多聚赖氨酸（Sigma公司），地塞米松(Dexamethasone)盐酸注射液（5 mg/mL，河南确山龙渊药业有限公司），氯化钠注射液（石家庄四药股份有限公司），冰醋酸（ 分析 纯，广州化学试剂二厂），TNFαELISA试剂盒、IL1β ELISA试剂盒、802型离心机（上海手术器械厂），450型酶标免疫测定仪（美国BioRad公司），Leica RM 2135型石蜡切片机（德国Leica公司），Galanz微波炉（广东格兰仕 企业 集团公司），NFκB/p65羊IgG单克隆抗体免疫组化SP试剂盒（北京中山公司）。超清级SD大鼠，雌雄各半，体质量180 g左右，由广东医学院动物中心提供，合格证号：2006A027。 　　1.2 方法 　　1.2.1 Ⅱ型胶原诱导的类风湿性关节炎（CIA）模型的制作 实验用大鼠60只，雌雄各半，按统计学方法随机分为6组:A 正常组对照组，B 模型对照组，C地塞米松组（2 mg/kg），D原花青素大剂量组(30 mg/kg)，E 原花青素中剂量组(6 mg/kg)，F 原花青素小剂量组(1.2 mg/kg)，每组10只。将Ⅱ型胶原15 mg溶于7.5 mL 预先配制好的0.1 mol/L 的醋酸中，质量浓度为2 mg/mL,共7.5 mL，4 ℃过夜，充分溶解。次日，与弗氏完全佐剂等体积于冰浴中混合，使之充分乳化，制成稳定的乳化剂15 mL,每毫升含1.0 gⅡ型胶原,置4 ℃冰箱保存备用。SD大鼠，除正常对照组外，以0.1 mL /只的剂量在鼠的左后肢足跖皮内注射。操作时，先将注射部位以75%(ρ)酒精棉球消毒，然后用1 mL注射器注射乳化剂，见皮肤