反相高效液相色谱法测定地榆中金丝桃苷的含量.docVIP

　　反相高效液相色谱法测定地榆中金丝桃苷的含量 【摘要】 　　目的建立地榆中金丝桃苷的高效液相色谱含量测定方法。方法采用RP-HPLC测定，C18柱，流动相为甲醇-0.2%磷酸溶液（46∶54），用三乙胺调pH至3.0，流速1.0 ml·min-1，检测波长370 nm；供试品溶液的制备采用甲醇超声提取。结果测定了不同产地不同批次的地榆药材，金丝桃苷质量分数在0.052%～0.291%。结论该方法灵敏快速，准确可靠，可用于地榆的质量控制。 【关键词】 地榆 金丝桃苷 反相高效液相色谱法 　 　　Abstract:ObjectiveTo establish a determination method of hyperoside in Sanguisorba officinalis. MethodsRP-HPLC analytical method n obile phase, the flol·min-1, and the detection . The method of sample 0.052～0.291% in different groups of S. officinalis collected from the different locations. ConclusionThe method is accurate and can be used for the quality of Sanguisorba officinalis. 　　Key g，置量瓶中，加甲醇定容至25 ml，其金丝桃苷含量为0.53 mg·ml-1。再精密吸取金丝桃苷对照品溶液2.0 ml，加甲醇定容至50 ml量瓶中，其金丝桃苷含量为0.021 2 mg·ml-1。 　　2.2 供试品溶液的制备 　　取地榆干燥药材或饮片的粉末（过100目）1 g，分别精密称定，至具塞锥形瓶中，精密加入甲醇100 ml，称定重量，超声提取1 h，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤过，用续滤液作为供试品溶液。 　　2.3 色谱条件 　　Hypersil ODS2分析柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相甲醇-0.2%磷酸溶液（46：54），用三乙胺调pH至3.0；流速1.0 ml·min-1；检测波长370 nm；柱温25℃；进样量10 μl；在选定的色谱条件下，理论塔板数以金丝桃苷峰 计算 不低于3 000。分离度大于1.5，拖尾因子在0.95～1.05。色谱图见图1。 　　2.4 检测波长的选择 　　取金丝桃苷对照品适量，用甲醇溶解后作紫外全波长扫描，λ286，370 nm, 因286 nm下非黄酮物质也有吸收，为避免干扰，选择检测波长为370 nm。 　　2.5 线性关系的考察 　　分别精密吸取0.021 2 mg·ml-1的金丝桃苷对照品溶液2，4，6，8，10，12，16 μl注入液相色谱仪，测定峰面积，以金丝桃苷含量（X）为横坐标，其峰面积吸收度积分值（Y）为纵坐标，绘制标准曲线，其回归方程为：Y = 2 263.9X+2.963 5，r = 0.999 8（n =7），表明金丝桃苷在0.04～0.34 μg线性关系良好。 　　2.6 精密度实验 　　精密吸取0.021 2 mg·ml-1金丝桃苷对照品溶液10 μl，连续进样5次，测得峰面积积分值RSD为0.86%，表明精密度良好。 　　2.7 重复性实验 　　精密称取同一样品粉末1 g（5份），按供试品溶液的制备方法制备，进样10 μl，测得金丝桃苷含量的RSD为0.99%，表明该方法的重复性好。 　　2.8 稳定性实验同一供试品溶液，从制备完毕开始放置，分别于0，2，4，6，8，10 h进样检测，其峰面积积分值RSD为1.9%。表明供试品溶液在10 h内比较稳定。 　　2.9 加样回收率实验 　　取已知含量的药材（6号含量1.60 mg·g-1）样品6份，每份0.50 g，精密称定， 计算 样品中金丝桃苷量，分别加入适量的金丝桃苷对照品，按样品制备方法和测试条件进行测定，计算加样回收率。结果见表1。表1 地榆中金丝桃苷的加样回收率（略） 　　2.10 样品测定 　　分别精密吸取各样品10 μl进样测定，计算含量，结果见表2。 表2 不同产地地榆样品的金丝桃苷含量（略） 　　 3 讨论 　　3.1 提取条件的选择 　　根据金丝桃苷的溶解性能，选择乙醇、甲醇、醋酸乙酯作为提取溶剂，比较了3种提取溶剂提取方法（超声、回流及索氏提取）和不同提取时间（0.5，1.0，1.5 h）对提取效果的影响。结果显示采用超声提取方法的提取率最高，甲醇提取效果最好，含量结果表明超声提取1.0 h可使待测成分提取完全。实验证实，含量并未