反相高效液相色谱法测定季德胜蛇药片中重楼皂苷I的含量.docVIP

　　反相高效液相色谱法测定季德胜蛇药片中重楼皂苷I的含量 【摘要】 　　目的建立反相高效液相色谱法测定季德胜蛇药片中重楼皂苷I的含量。方法采用Agilent Zorbax SB C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相为乙腈－水（45∶55）；流速1.0 ml/min，柱温30℃，检测波长为210 nm。结果重楼皂苷I在0.009 645～0.964 5 mg/ml范围内与峰面积呈良好的线性关系，r=1.000 0；平均加样回收率为99.21％，RSD为0.75％（n＝9）。结论该法简便、准确，重复性较好，可用于测定季德胜蛇药片中重楼皂苷I的含量。 【关键词】 重楼皂苷Ⅰ；季德胜蛇药片； 高效液相色谱 　　Abstract:ObjectiveTo develop an HPLC method for determination of Chonglou Saponin I in Jidesheng Sheyao tablets. Methods The HPLC method n（4.6 mm×250 mm，5 mm）, the mobile phase l/min. The detection . ResultsThe method had good linear relationship g/ml. The average recovery ethod is simple，accurate and reliable. It is appropriate for the determination of Chonglou Saponin I in Jidesheng Sheyao tablets. 　　Key m×250 mm，5μm）；流动相：乙腈-水（45∶55）；流速1.0 ml/min；检测波长210 nm；柱温30℃；进样量20 ml。 　　2.2 对照品溶液的制备 　　精密称取经40℃减压干燥2 h的重楼皂苷I对照品适量，加甲醇溶解并稀释制成每毫升中含0.1 mg的溶液，即得。 　　2.3 供试品溶液的制备 　　取本品20片，研细，精密称取2.0 g，置100 ml具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25 ml，密塞，称定重量，超声处理40 min（功率250 W，频率40 kHz），放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，即得。 　　2.4 阴性对照溶液的制备 　　按处方比例制备不含重楼的阴性样品，照供试品溶液的制备方法制备阴性对照溶液。 　　2.5 专属性实验 　　在以上的色谱条件下，重楼皂苷I的保留时间约为25 min，理论板数按重楼皂苷I峰 计算 为12 148，阴性对照溶液在重楼皂苷I对照品相应的保留时间处无干扰，供试品溶液中重楼皂苷I峰和相邻色谱峰间完全分离。色谱图见图1。 　　2.6 峰纯度检测 　　应用二极管阵列检测器和色谱工作站系统对所测组分色谱峰进行分析，供试品溶液中重楼皂苷I峰的纯度系数（purity index）为996.710，表明峰纯度很高。 　　2.7 检测限及定量限取对照品溶液稀释若干倍进样，记录主药峰高约为噪音峰高3倍时的色谱图，测得重楼皂苷I的检测限为16.4 ng；记录主药峰高约为噪音峰高10倍时的色谱图，测得重楼皂苷I的定量限为48.2 ng。 　　2.8 线性实验精密称取重楼皂苷I对照品19.29 mg，置20 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度。精密量取适量，分别用甲醇稀释成每毫升中含9.645，19.29，48.225，96.45，192.9，385.8，578.7，771.6 μg的溶液，摇匀，精密量取20 μl注入液相色谱仪，测定峰面积，以峰面积A为纵坐标，重楼皂苷I浓度C（mg/ml）为横坐标，进行线性回归，得回归方程为： 　　A=3264.954 4C-7.9411，r=1.000 0（n=9） 　　表明重楼皂苷I浓度在0.009 645～964.5 mg/ml 范围内与峰面积呈良好的线性关系。 　　2.9 进样精密度实验取对照品溶液和供试品溶液分别重复进样6次，测定重楼皂苷I的峰面积，计算RSD分别为0.39％与0.29%。表明进样精密度良好。 　　2.10 日间精密度实验取同一批样品，分别于不同日期进行精密度实验，计算日间误差。结果见表1。表1 日间精密度结果（略） 　　2.11 重复性实验取同一批样品（060608），平行制备6份供试品溶液，分别测定。重楼皂苷I的平均含量为1.334 mg/g，RSD为1.41%。表明方法的重复性较好。 　　2.12 溶液稳定性实验 取供试品溶液自配制后分别在0，1，3，6，9，12，24 h测定峰面积，RSD为0.45％，表明该溶液在24 h内稳定。 　　2.13 加样回收