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PAGE 42 烟用香精和料液中苯甲酸、山梨酸、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯的测定—高效液相色谱法 (实 验 报 告) 云南烟草科学研究院 云南烟草质量监督检测站 目 录 一、前 言 1 二、标准的适用范围 3 三、原理 3 四、烟用香精和料液中苯甲酸和山梨酸的测定 4 4.1、主要仪器和试剂 4 4.2、样品前处理步骤 5 4.3、液相色谱条件 5 4.4、标准曲线的制作 6 4.5、结果与讨论 6 4.5.1、标准溶液稳定性 6 4.5.2、色谱条件的选择 7 4.5.3、样品前处理条件的选择 10 4.5.4、方法的检出限和定量限 13 4.5.5、工作曲线范围 13 4.5.6、精密度实验 14 4.5.7、回收率试验 14 4.5.8、样品稳定性 15 4.5.9、比对实验 15 4.5.10、方法适应性实验 16 五、烟用香精和料液中对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯的测定 17 5.1、主要仪器和试剂 17 5.2、样品前处理步骤 18 5.3、液相色谱条件 18 5.4、标准曲线的制作 19 5.5、结果与讨论 20 5.5.1、标准溶液稳定性 20 5.5.2、色谱条件的选择 20 5.5.3、样品前处理条件的选择 24 5.5.4、方法的检出限和定量限 26 5.5.5、工作曲线范围 26 5.5.6、精密度实验 27 5.5.7、回收率试验 28 5.5.8、样品稳定性 28 5.5.9、比对实验 29 5.5.10、方法适应性实验 30 六、结论 30 参考文献 31 附录、6种防腐剂成分的HPLC-MS/MS法测定 36一、前 言 烟用香精、料液是一类重要的烟用添加剂，其主要成分是糖、甘油、丙二醇、合成香料、天然提取物等；合理的加料对于掩盖天然烟草的刺激性和杂气、提高或改善卷烟的香味、增加烟丝韧性、提高保润性、改善燃烧性和减少碎损等方面均起到重要作用。由于有许多烟用香精、料液来自天然提取物，为了防霉败变质，可能会添加防腐剂[1-4]。防腐剂是指用于加入食品、药品、颜料、生物标本等，能延迟微生物生长或化学变化引起的腐败的天然或合成的化学物质。食品工业中最常用的防腐剂为苯甲酸、山梨酸和对羟基苯甲酸酯类[5,6]。大量毒理学试验表明：防腐剂成分用量过多会对人体肝脏产生危害[7,8]。世界各国都对食品和食品添加剂中可使用的防腐剂的种类和用量均有严格的要求；如：我国的GB 2760-2011《食品添加剂使用标准》明确规定了防腐剂的使用范围和最大使用量，最大限量为：苯甲酸及其钠盐0.2 mg/g - 2.0 mg/g，山梨酸及其钾盐0.2 mg/g - 2.0 mg/g，对羟基苯甲酸酯类及其钠盐0.2 mg/g - 1.0 mg/g，允许用量因食品类型不同而有差异[9]。联合国粮农组织及世界卫生组织(FAO/WHO)所属的食品添加剂专家委员会(JECFA)规定了食品添加剂的日许量(ADI值)：苯甲酸为5.0 mg/kg，山梨酸为25.0 mg/kg，对羟基苯甲酸酯类为10.0 mg/kg (单位为：每千克体重允许摄入的毫克数)[10,11]。 由于防腐剂在食品工业中得到广泛应用，其安全性也广泛引起人们的关注；考虑到食品的安全问题，防腐剂的定性和定量检测就显得尤为重要，在国内外均受到了高度关注。国内外学者都对防腐剂成分的检测方法进行过大量研究工作,并多次对该领域的研究进展情况进行过综述[12-16]。目前防腐剂成分检测常用的方法主要有：紫外分光光度法[17,18]、气相色谱法[19-21]、高效液相色谱法[22-24]、毛细管电泳法[25-27]、红外光谱法[28,29]、生物检测法和生物传感器法等 [30,31]。在这些方法中，紫外分光光度法操作繁杂，试验条件控制严格，耗时较长。红外光谱法预处理简单，是分析鉴定的有效方法；但是其灵敏度低，抗干扰能力弱，不适合低含量成分的测定。气相色谱法和高效液相色谱法得到广泛的实际应用，并被广泛被采用作标准方法。 气相色谱法测定防腐剂成分时，样品预处理需先将样品酸化，用乙醚萃取、浓缩后再进行测定[32,33]，该类方法环境污染大且操作麻烦，而且手工萃取操作会导致分析结果误差大。也有固相萃取、固相微萃取、基质固相分散等新前处理方法的文献报道[12-16,19-21]；但这些新样品前处理技术还处于基础研究阶段，还没有被标准方法采用。 高效液相色谱法可对于气相色谱法不能分析的高沸点或稳定性差的成分可以进行有效的分离检测，样品预处理相对简单；是目前防腐剂成分测定中应用最广泛的方法，在国内外均有许多高效液相色谱测定防腐剂成分的文献报道，还被多个国家和行业采用为标准方法[34-3