抗纤益心方对扩张型心肌病大鼠心肌TGF.docVIP

　　抗纤益心方对扩张型心肌病大鼠心肌TGF 作者：王振涛，韩丽华，惠玲，杨凤鸣，张颖 【摘要】 目的观察抗纤益心方对扩张型心肌病大鼠心肌转化生长因子β1（Transforming Groatrixc,ECM)的变化是心室重构的结构基础。心肌细胞外基质时刻处于一个动态的合成－降解的过程，一旦动态平衡被打破，胶原 网络 发生重建，必将加重左室重构的程度［1］。有研究表明，TGF-β1在心肌胶原网络重建中起重要作用［2］。本研究通过观察抗纤益心方对扩张型心肌病大鼠心肌TGF-β1表达水平的影响探讨其作用机制。 　 　1 材料与仪器 　　1.1 用药抗纤益心方干浸膏(由党参，黄芪，云苓，白术，丹参，川芎，红花，赤芍，泽兰，益母草组成)：由河南省中 医院 制剂室提供，每克浸膏相当于生药4 g；呋喃唑酮片：福建省三明天泰制药有限公司生产，批号卡托普利片：常州制药厂生产，批号：200502242；戊巴比妥钠： 中国 医药（集团）上海化学试剂公司生产，批号： 　　1.2 试剂TGF-β1多克隆抗体，购自北京博奥森生物技术有限公司。 　　1.3　仪器精密 电子 天平（上海民桥电子仪器厂JY-1001型）；石蜡切片机(德国莱卡公司，型号SM-2000R）；光学显微镜（日本OLYMPUS公司）；摄影显微镜（德国莱卡公司）；Image-Pro Plus 6.0（IPP）图像处理分析系统（美国Media Cyberics公司）。 　 　2 方法 　　2.1 动物造模及分组选取体质量为（61.9±7.0）g的g呋喃唑酮配置) 喂养，喂养8周。正常组动物常规饲养，不进行药物干预。 　　2.2 治疗 方法造模8周后开始药物干预，给药1次/d。正常组动物常规饲养，不进行药物干预；模型组动物每日管饲与治疗组同等容积的生理盐水；抗纤益心方治疗小剂量组动物每日管饲抗纤益心方4.7 g/（kg·d）；抗纤益心方治疗大剂量组动物每日管饲抗纤益心方18.8 g/（kg·d）；卡托普利对照组动物每日管饲卡托普利10.125 mg/（kg·d）；中西药联用组动物同时管饲卡托普利及抗纤益心方大剂量。8周后处死动物。 　　2.3 心肌取材动物麻醉后，迅速打开胸腔，取出心脏，滤纸吸干水分，剪去左、右心房及右心室，然后从心尖处沿冠状面切取心肌组织，放入10%中性缓冲福尔马林液中固???，石蜡包埋，制备厚4 μm组织切片。 　　2.4 观察指标TGF-β1阳性表达平均光密度值（OD）的测定：用免疫组化法染色组织切片。光镜下，每只大鼠观察6张切片，每张切片在图像分析系统上随机选取相等的5个高倍视野(×400)，测定OD值，每张片子测量后取平均值。平均光密度与阳性染色度成正比，即平均光密度值越大，代表阳性染色越强。 　　2.5 统计学方法数据用SPSS13.0 For Windo. 　 　3 结果 　　3.1 各组TGF-β1阳性表达的比较光镜下，各组TGF-β1的阳性染色呈棕黄色或棕褐色，阳性区域主要分布于心肌间质细胞内（见图1）。各组TGF-β1染色可见：正常组心肌纤维排列整齐，心肌细胞间质中有少量棕黄色阳性表达，颜色较淡。模型组心肌细胞间质中有大量棕黄色或棕褐色阳性表达，可看到阳性染色成片或反复重叠排列在心肌间质中，染色较深。卡托普利组、中药大剂量组、中西药联用组心肌细胞结构清晰，心肌细胞间质中有部分棕黄色阳性表达，三者无明显差别，但与模型组相比，表达明显减少。 　　3.2 各组OD值比较正常组、中西药联用组、中药大小剂量组和卡托普利组与模型组相比TGF-β1阳性表达明显减少（Plt;0.05）；中西药联用组、卡托普利组、中药大剂量组和小剂量组与模型组相比明显抑制TGF-β1阳性表达（Plt;0.05），其中以中、西药联用组效果最好；中药大剂量组与模型组比较对其改善作用明显（Plt;0.05）；与卡托普利组作用相似（Pgt;0.05）；与中药小剂量组比较有统计学意义（Plt;0.05）。 　　表1 TGF-β1OD值的比较（略） 　　 4 讨论 　　扩张型心肌病是一种病因未明、主要以单侧或双侧心腔扩大、心肌收缩功能减退、伴或不伴有充血性心力衰竭为特征的心肌疾病。心室重构是该病 发展 的重要病理环节，因此，对于扩张型心肌病心室重构的研究已成为近年来心血管疾病病理生理研究的一个热点。 　　从细胞和分子水平看，在心室重构过程中，心肌细胞和细胞外基质的变化是心室重构的结构基础。研究表明心室重构是细胞外基质促合成与促降解在高水平上的失平衡的结果［4］，使平衡偏向于促生长的效应，导致成纤维细胞增生及心肌间质纤维化等病理性变化。多种因素参与了细胞外基质重构，参与这一过程的主要有肾素-血管紧张素-醛固酮系统（renin-angi