正交试验法优化茵栀黄颗粒提取工艺.docVIP

　　正交试验法优化茵栀黄颗粒提取工艺 【摘要】 优化茵栀黄颗粒的提取工艺。［ 方法 ］以干膏得率和绿原酸提取率为考核指标，采用正交设计法对茵栀黄颗粒水提取工艺进行考察。［结果］茵栀黄颗粒最佳提取工艺的方案为A2B1C2，即加水量为8倍，提取2次，每次1h。［结论］优选的提取工艺 科学 合理，适于大规模生产。 　　 【关键词】 茵栀黄颗粒 高效液相色谱法 正交试验 提取工艺 　　Abstract：［Objective］To optimize extracting procession of Yinzhihuang granules.［Methods］ The extraction procession arker.［Results］ The optimum extraction condition is A2B1C2, es,1 hour at every time.［Conclusion］ The optimized pol，置于已干燥至恒重的蒸发皿中，在水浴上蒸干后，于105℃干燥至恒重， 计算 出干浸膏得率，结果见表2。 　　2.4 绿原酸含量的测定 （1）色谱条件 色谱柱为SymmetryR C18柱（4.6×250nm，5mm）；流动相为乙腈0.4%磷酸水溶液（8∶92）；流速：1mL/min；进样量：20mL；柱温：30℃；柱效： 理论 板数不低于4000。在此条件下，绿原酸与其他组分能达到较好分离,峰纯度达到要求，见图1。 　　图1 绿原酸对照品与样品的高效液相色谱图（略） 　　1.对照品；2.样品 　　（2）对照品溶液的制备 精密称取绿原酸度对照品4mg，置50ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，即得。（3）供试品溶液的制备 精密吸取提取液1ml，置10ml量瓶中，加0.1ml冰醋酸，加水稀释至刻度，摇匀，离心，用微孔滤膜（0.45mm）滤过，取续滤液避光保存，作为供试品溶液。（4）标准曲线的制备 精密量取绿原酸对照品溶液1.0、2.0、4.0、6.0、8.0ml置10ml量瓶中，加入0.1ml冰醋酸，加水稀释至刻度，混匀，以微孔滤膜（0.45mm）滤过。各取续滤液20μl分别注入液相色谱仪,测定峰面积。以峰面积为纵坐标，对照品的进样量（μg）为横坐标作图（见图2）,得到一条直，其回归方程：y=26.083x0.0772（r=0.9999），说明绿原酸在0.1616～1.2928mg范围内，与峰面积之间呈良好的线性关系。 　　图2 绿原酸对照品的标准曲线（略） 　　（5）精密度考察 精密吸取对照品溶液20μL，连续进样5次，在上述色谱条件下测定绿原酸对照品的峰面积，平均峰面积为1609030；RSD=0.67%。（6）稳定性试验 精密吸取供试品溶液20μl，分别于0、1、2、3、4和6h进样，测定供试品溶液中绿原酸的峰面积，RSD=1.07%，说明样品溶液在6h内稳定。（7）重现性试验 精密量取同一批提取液5份，按供试品溶液的制备项下制备试液；进样20μl，测定峰面积，RSD为1.24％，重现性良好。（8）回收率试验 精密量取已知含量的提取液6份，置10ml棕色量瓶中，分别加入绿原酸对照品，按供试品溶液的制备项下制备试液；进样20μl，依法测定绿原酸含量， 计算 回收率，结果见表3。平均回收率为99.19%，RSD=1.26%。（9）含量测定 精密量取对照品溶液4ml置10ml量瓶中，加0.1ml冰醋酸，加水至刻度，摇匀，微孔滤膜（0.45mm）过滤，制成每1ml含绿原酸32μg的对照品溶液。精密吸取提取液1ml，置10ml量瓶中，加0.1ml冰醋酸，加水稀释至刻度，摇匀，离心，用微孔滤膜（0.45mm）滤过，取续滤液避光保存，作为供试品溶液。分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20ml；注入液相色谱仪，按外标法以峰面积计算，结果见表2。 　　表3 回收率试验结果（略） 　　表2 正交试验结果（略） 　　2.5 结果 分析 方差分析结果见表4和表5。以干膏得率为考察指标，表2中极差R值大小显示，各因素作用主次为Cgt;Agt;B；方差分析结果表明：C因素 影响 有显著性差异（Plt;0.01），A和B因素对干膏得率则无显著性影响（Pgt;0.05），以A3B3C3组合为佳。以绿原酸提取率为考察指标，表2中极差R值大小显示，各因素作用主次为Cgt;Agt;B；方差分析结果表明：A因素和B因素对绿原酸提取量无显著性影响（Pgt;0.05），而C因素的影响有极显著性差异（Plt;0.05），以A2B1C2组合为佳。 　　表4 浸膏得率方差分析表（略） 　　表5 绿原酸提取率方差分析表（略） 　　2.6 验证试验 鉴于绿原酸提取量这一指标较重要，同时兼顾省时节能，故拟确定水提取工艺为A2B