沙苑子中沙苑子苷A对照品的制备及鉴定.docVIP

　　沙苑子中沙苑子苷A对照品的制备及鉴定 作者：吴文倩 刘银芳 张娟 顾振纶 郭次仪 刘春宇 【摘要】 目的建立从沙苑子中制备沙苑子苷A对照品的方法。方法采用大孔树脂富集、聚酰胺柱色谱、硅胶柱色谱和重结晶方法对沙苑子80％乙醇提取物进行分离纯化，通过MS、IR、UV、1H-NMR和13C-NMR进行结构鉴定，通过TLC和HPLC对对照品进行纯度检测。结果从沙苑子中分离、纯化出沙苑子苷A对照品，质量分数gt;99.0％。结论该方法制备的沙苑子苷A对照品符合中药化学对照品的相关要求，可作为沙苑子药材及其制剂质量控制，以及中药药效物质基础研究用的化学对照品。 【关键词】 沙苑子； 沙苑子苷A； 对照品 　沙苑子为豆科植物扁茎黄芪Astragalus planatus R.Br.干燥成熟的种子［1］，能温补肝肾、固精、缩尿、明目，用于 治疗 肾虚腰痛，遗精早泄，白浊带下，小便余沥，眩晕目昏；始载于《图经本草》，名为白蒺藜。 　　沙苑子主要含有黄酮类、三萜类、有机酸类、氨基酸等。黄酮类成分是沙苑子的主要有效成分，具有许多药理活性。近年来研究认为沙苑子总黄酮可保护大鼠重要器官免受运动损伤，明显提高大鼠的运动能力［2］，抑制肝纤维化形成［3］，抗肿瘤［4～6］，此外对SHR和RHR［7～8］有明显的降压作用。但有关沙苑子的质量标准中，由于缺少化学对照品，尚无沙苑子黄酮含量控制指标，2005年版的《 中国 药典》中沙苑子的质量标准也仅有性状、显微、荧光检测等内容。为了进一步研究和完善沙苑子的质量标准，迫切需要研制一种或多种对照品。沙苑子苷A是沙苑子黄酮的主要特征性成分，且在沙苑子中的含量较高，也是沙苑子保肝抗肝纤维化的主要有效成分之一。本文从沙苑子中提取、分离和纯化沙苑子苷A，制备沙苑子苷A对照品，为制定和完善沙苑子及其制剂的质量标准提供沙苑子苷A对照品。 　 　1 仪器与材料 　　美国Nicolet公司FT-IR Magna-550红外光谱仪 (KBr压片)；美国VARIAN公司INVOA-400超导核磁共振谱仪核磁共振仪；美国ABI Qtrap2000液相色谱－质谱仪；英国MICROMASS GCT OA-TOF高分辨质谱仪；惠普7530-GUV/VIS紫外光谱仪；岛津LC-20A高效液相色谱议，SPD-M20A二极管阵列检测器，岛津1.22 SP1色谱工作站；eoH：266.2，333.8；IRKBRMAX 3 371.8（γOH），1 655.0（γC＝O），1 597.2，1 500.7（Ar）：1 253.8(Ar-O-C),1 076.4,1 022(C-O)；Ei-MS m/e :(苷元)300（M－162＋H），271，121；Mariner Mass (m/2)625.18 (M＋624+1);463.12(M＋-162+H);274.27;206.99说明该化合物含两个六碳糖。13C-NMR: （见表1）。1H-NMR:12.569(1H,s,5-OH),8.169 (2H,d,J=9 Hz,2′,6′-H,7.16(2H, d,J=9 Hz, 3′,5′-H),6.80(1H,d,J=1 Hz,8-H),6.41(1H,d,J=1 Hz,6-H),5.50(1H, d, J=7 Hz, glc1″-H),5.39(1H,d,J=7 Hz,glc1″′ -H),3.87(3H, s,7-OCH3)。根据以上数据分析，与 　　2.3 对照品的纯度检测 　　2.3.1 对照品的杂质检查 　　薄层色谱法检查：取适量沙苑子苷A对照品，50%乙醇制成1 mg/ml的溶液，以醋酸乙酯∶醋酸∶水（10∶2∶2 上层液）和氯仿∶甲醇∶水（6.5∶3.5∶1）为展开剂，点样量5，10，20 μl，在硅胶G板上进行展开，以1%AlCl3乙醇溶液为显色剂，分别在365 nm紫外灯和日光下观察。另于聚酰胺薄膜上，以丙酮∶水（1∶2）进行展开，1%AlCl3乙醇溶液为显色剂，在365nm紫外灯下观察。结果表明，在3种展开剂中对照品均为一个黄绿色斑点，未见杂质斑点。比移值Rf分别为：0.31，0.82，0.36。 　　高效液相色谱检测：色谱柱VP-ODS（150 mm×4.6 mm,5 μm）；分别以乙腈∶1%乙酸（22∶78），（16∶84），（14∶86）为流动相；流速：1 ml/min；柱温：40℃；检测波长：266 nm，对照品溶液质量浓度为0.1 mg/ml,进样量20 μl。结果表明，在3种流动相下对照品均为一个主峰，保留时间分别为:7.45,16.71，28.46 min。改变流动相分析时未出现异常峰。 　　2.3.2 面积归一化法纯度检查色谱柱VP-ODS（150 mm×4.6 mm,5 μm）；