国内HPV DNA检测的常见方法比较.pdfVIP

检验医学 2012 年 l 月第 27 总第 l 期 Laboraωry Medicinc , Janu町 2012 ， Vo) 27. No l. . 7 1 • 文章编每 : 1673-8ω(2012 ) 01拍71 .Q4 中图分羹号: Q503 交献标志码 :A 国内 HPV DNA 检测的常见方法比较 王巧燕1 ， 陈伟华2 ( 1.东阳市人民医院检验科，浙江东阳 322100. 2. 上海复星医学科技发展有限公司， r.海 2ω233 ) 关键询:人乳头痛病毒:方法学;宫呈现衔 人乳头瘤病毒( HPV)感染是富颈癌的主要 致病元凶，研究表明 99 . 7% 的宫颈幽患者存在 HPV 感染1 1 : 。 由于 HPV 感染与富颈癌的高度相 关性，而 HPV 阴性者几乎不会发生宵颈癌。 而且 HPV 感染与宫颈癌的发生有时序关系，符合生物 学致病机理。 现有研究都强有力的支持了 HPV 感染与宫颈癌之间的因果关系，表明 HPV 感染是 富颈癌发生的必要病因条件[2 1 0 所以在临床上 对富颈癌的筛查中进行 HPV DNA 的检测是一项 极为必要和有临床价值的筛查手段[ 3 1 。 目前国 际上很多发达国家都已经将 HPV DNA 检测列为 宵颈癌筛衡的必枪项目，并已经列入宫颈癌诊断 防治指南中I叫 ，而这些筛查手段在发展中国家包 括巾国还远未普及。 目前l:!iI内临床上进行 HPV DNA 检测的主要方法有实时荧光聚合酶链反应 (PCR) 法 、 基因芯片法 、 杂交捕获法( Hybrid Capture Il, HC- II ) 。 这 3 种方法作为临床宫颈痛 筛查的手段各有优劣.我们从方法学的角度进行 综合性分析和比较，可为临床宫颈癌筛查方法选 择提供借鉴和参考。 一、日C-ß HC-II 是美国 Digene 公司开发生产的，已获 美国药品食品监督管理局( FDA) 批准用于临床 HPV DNA 检测的技术 ，在国内也被引进到一些医 院用于临床 HPV DNA 检测和富颈癌筛查IMU HC- II 本质上是基因杂交信号放大技术，采用分 子杂交和化学发光信号放大的原理，无需基因扩 增，属于线性级数放大。见图 1 。 该技术采用全 长 8 创泊个碱基的 RNA 探针，靶 DNA 变性为单 链后与 RNA 探针杂交，形成 DNA-RNA 杂交体， 再被包被了抗 DNA-RNA 杂交体抗体的徽孔板捕 获，DNA-RNA 杂交体与标有多个碱性磷酸酶的第 2 抗体结合，通过酶化学发光测定信号强度，与标 准品比较有软件计算出样本中靶核酸的浓度。 HC-II 技术实际上是核酸杂交、免疫反应和化学 发光技术的综合运用.具有 HPV 分群(高危群和 低危群)功能，但不具有精确分型功能。该方法 采用半自动检测方式.杂交温浴、洗涤、光采集仪 操作分步进行，手动转移操作。 1 2 3 4 ~ 1在 : 1 为桥本 DNA 双链被精放并分解为核背酸很链 ;2 JJ DNA 单链与 RNA!第~f结合为 DNA/RNA 杂交体;3 为第 l 抗体将 DNAlRNA 杂交体l占1寇在试ff~l微乎L~上升为综合有在性磷lIIì俐的多个第 2 抗体写 DNAlRNA 杂交体综合.使馆号放大;5 为iltt确俄国酷似l底物ðt 光.:f.IJì卖光的强弱可确定破性磷酸酶的含量.从而i确定 ONAlRNA 的含 Iït 国 1 HC- n 的检jY，IIJ j(理 作者简介:下;Jj燕.女 .1977 年生 . f:士.主管校师. 斗三要从事免疫 ，PCR 检验工作。 通讯作者:陈伟华 ，联系rtH码 :021 ~755845 0 .72. 检验医学 2012 年 1 月第 27 卷第 1 期 Laboratory Medici肘， January 2012 , Vol 27. No 1. 该方法已经广泛地用于宫颈癌的筛查和随 访。 HC-ll 发现高度鳞状上皮内病变( HSIL) 的灵 敏度为 959毛，明显优于液基细胞学，但是特异度 为 859毛，略低于液基细胞学。由于该方法在国外 开发及上市较早，国内后来开发的其他方法学 HPV DNA 检测试剂基本上都与该方法学做临床 比对和验证。虽然尚不能成为 HPV 诊断金标准， 但也为后来国内 HPV 诊断试剂的研发提供了一 个极有价值的参照体系。但是随着近年来国内外 的广泛应用，也逐渐暴露出一些临床上的缺点和 问题[8J 。比如易产生交叉污染，成本费用较高， 高危型与低危型存在一定的交叉反应[9] ，并且国 外已有文献报道存在个别的高危型漏检率[8J 。 二、基因芯片法 基因芯片法是指在固相支持物上原位合成寡 核昔酸或者直接将大量 DNA 探针以显微打印的 方式有序地固化于支持物表面