碘普罗胺和碘比醇对大鼠骨髓间充质干细胞增殖的影响.docVIP

　　碘普罗胺和碘比醇对大鼠骨髓间充质干细胞增殖的影响 【摘要】 目的: 探讨碘普罗胺（IP）和碘比醇（IB）对大鼠骨髓间充质干细胞（MSCs）的 影响 。 方法 : 将大鼠骨髓MSCs按2×10 3 /孔接种于96孔板培养48h后，改为IP或IB培养液（碘浓度分别为0、10、50、100、200、500、1000、2000μmol/L）各200μl继续培养，之后于不同时间点测定OD值;另外细胞按8×10 3 /孔接种于24孔板，加IP或IB培养液各400μl孵育3d后， 计算 细胞活力。 结果: 不同碘浓度IP培养液培养1d、2d、3d和4d不同时间点，各组OD值相比无统计学差异（Pgt;0.05），培养3d时，细胞活力在96.9%～98.2%之间;不同碘浓度IB培养液培养的不同时间点，各组OD值无统计学差异（Pgt;0.05），培养3d时，细胞活力在96.5%～98.1%之间。 结论: IP和IB均不影响大鼠骨髓MSCs增殖，亦不增加细胞死亡。  【关键词】 大鼠;骨髓;间充质干细胞;碘普罗胺;碘比醇 　　间充质干细胞（mesenchymal stem cells，MSCs）尤其是骨髓MSCs由于具有自我复制性、非特异的弱免疫原性以及多潜能性而成为当今 研究 的热点，它可以分化成功能性心肌样细胞、刺激梗死区血管新生、抑制心肌细胞凋亡和防治心肌重构 ［1］ ，因而成为心肌细胞成形 治疗 （CCM）的基础细胞。但是临床上冠状动脉内输注MSCs前，一般需 应用 碘普罗胺（IP）或碘比醇（IB）等造影剂，那么骨髓MSCs是否会受到它的影响尚不清楚。本研究旨在探讨IP，IB对大鼠骨髓MSCs的影响。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 SCs分离、培养 将SCs向骨诱导分化 将第三代MSCs进行成骨细胞诱导分化 ［2］ 。按1×10 4 接种细胞于6孔培养板培养48h，3孔加入H-DMEM成骨细胞诱导分化培养液，另3孔加入正常培养液作为对照，每72h换液一次，14d时采用改良Gomori钴钙法碱性磷酸酶染色，显微镜下观察和拍照。 　　1.5 细胞接种及IP和IB干预 将培养板长轴作为行，短轴作为列，空余一孔（第一行第一列），细胞按2×10 3 /孔接种于96孔板（共8板）37℃、5%CO 2 条件下培养48h。完全弃去培养液后4板添加含IP培养液（每行碘浓度分别为0、10、50、100、200、500、1000、2000μmol/L）各200μl，另4板添加含IB培养液（碘浓度同IP）各200μl，置于培养箱（37℃、5%CO 2 ）中孵育，每隔2d全量换液。另按8×10 3 /孔接种于24孔板1板，加IP或IB培养液400μl孵育3d。 　　1.6 OD值和凋亡细胞百分比 在IP或IB培养液前1d和2d及孵育1d，2d，3d和4d后，（即细胞培养第3d，4d，5d和6d），按说明用MTT法检测细胞增殖状况，酶联免疫检测仪490nm波长下检测各孔光吸收值（OD值），在计数前3min分别在24孔板的每孔中滴加0.4%PBS台盼蓝溶液100μl，按序随机选取5个不重叠高倍视野（400×），在倒置显微镜下分别计数活细胞（未着色）和死细胞（着色）数，按活细胞率（%）=活细胞总数/（活细胞总数+死细胞总数）×100%，求得细胞活力。 　　1.7 统计学 分析 数据以均数±标准差（x±s）表示，采用SPSS12.0软件包进行统计学处理，组间、组内比较均进行非配对样本t检验，检验水准α=0.05，Plt;0.05具有统计学意义。 　　2 结果 　　2.1 骨髓MSCs的生成 骨髓单个核细胞P 2 代培养5d时可95%铺满瓶底，呈典型均一的纤维样细胞形态并且CD44染色阳性。加入骨诱导分化液孵育14d后，细胞ALP呈阳性，证实其为骨髓MSCs。2.2 IP和IB培养液对MSCs增殖的 影响 具体结果见表1，2。 　　表1 IP培养液对MSCs增殖的影响（略） 　　注:各组间组内比较，Pgt;0.05 　　表2 IB培养液对MSCs增殖的影响（略） 　　注:各组间、组内比较，Pgt;0.05 　　2.3 细胞活力的比较 上述碘浓度IP培养液培养3d时，活细胞率分别为97.5%，98.2%，97.7%，97.8%，96.9%，97.3%和97.8%，IB培养液活细胞率分别为97.4%，98.0%，98.1%，97.5%，97.9%，96.5%和97.5%，与对照组（98.1%）相比，细胞活力无统计学意义（Pgt;0.05）。 　　3 讨论 　　1976年FriedenstEin发现MSCs易于贴附于塑料培养皿上而首创贴壁筛选，该法联合密度梯度离心法可有效清除造血细胞等，成为当前最为