简易组织芯片仪的制作.docVIP

　　简易组织芯片仪的制作 【关键词】 芯片分析技术； 分子探针技术； 显微镜检查 与传统的病理研究方法相比，组织芯片具有省时、 经济 、信息量大，并能节约标本及大大提高实验效率等优点，应用非常广泛[1]，但由于组织芯片机价格昂贵，难以普及推广。笔者利用本科室退役的显微镜研制组织芯片仪，并用其制作组织芯片，取得很好的效果，现报告如下。 1 材料与方法 1.1 材料 骨髓穿刺针2支（16G和18G），16 4螺纹的骨髓穿刺针（最小内径为1.1 mm）用于取样；18G带有M4螺纹的骨髓穿刺针（最大外径为1.3 mm）用于打孔。用砂轮将针尖末端截断（包括芯和鞘），保留螺纹以下至针尖末端的长度约1～2 cm。取一段内径分别与16G或18G骨髓穿刺针外径相当的单芯电线绝缘护套，将其相应地紧紧套在16G或18G骨髓穿刺针的鞘上，使其下缘与针末端的距离为5 mm。塑料外套与针末端的距离可根据供体蜡块的厚度调整，但打孔针和取样针的外套层和针末端的距离应保持一致（图1）。 上为打孔针，下为取样针. 图1 打孔针和取样针的制作 Fig 1 Top one is hole puncture needle and bottom one is sampling needle 1.2.2 恒温加热装置的制作 根据热学原理设计出蓄热体（由45号圆钢加工制成）（图2A、B），内嵌入加热元件（图2C），采用双加热系统，通过温控装置调节温度，使其保持在（60±1）℃（较石蜡的熔点58 ℃稍高），保证打孔针和取样针处于恒温。 1.2.3 操作平台和矩阵定位系统的制作 利用退役的显微镜，保留机械和支架系统，利用载物台放置供体蜡块和受体蜡块。用一块厚度为3 mm的有机工程塑料板，制成尺状结构，利用强力胶水粘在显微镜的推进器上，用于蜡块的准确定位（图3）。推进器用于受体蜡块打孔时前后（X轴）左右（Y轴）的位移，以保证所打的孔矩阵排列整齐。旋转镜柱上的调节器（粗细螺旋）使镜台作上下方向（Z轴）的移动，实现打孔和取样深度的准确控制。至此，一台功能基本齐全的组织芯片仪就改装成功，并可用于组织芯片的制作（图4）。 1.3 结果 用制作完成的组织芯片仪制作组织芯片，芯片以规则的点阵方式排列不同的圆形组织芯片样本，排列整齐，无点阵移位现象，供、受体蜡块紧密融合，经HE染色验证，样本组织大小均匀、结构完整（图5）。 　 　2 讨 论 笔者自行研制组织芯片仪，实现废物利用，制作成本低廉；且应用此组织芯片仪制作组织芯片，简化了对蜡块的烘烤等制作流程，对操作者的技术要求不高，只要简单培训即可做出高质量的组织芯片。 在制作芯片仪的过程中，选择打孔针和取样针时应注意针的孔径，打孔针的外径要等于或稍大于取样针的内径，但最多不超过0.2 mm，以保证供受体蜡块完全融合；打孔针和取样针的有效使用长度应适宜（约1～2 cm），太长导热慢且效果差，而且容易变形，无法保证针的刚性，太短则无法有效地打孔和取样；塑料外套与打孔针和取样针末端的距离可根据供体蜡块的厚度调整，但两针的外套层和末端的距离应相等，保证打孔的深度与所取的组织芯柱的长度一致，使所有待检的组织芯片在受体蜡块的同一水平面上。在恒温加热装置的设计时将温度控制在（60±1）℃，比石蜡的熔点58 ℃稍高一些，其目的是：（1）在打孔和取样的过程中供、受体蜡块不开裂；（2）受体蜡块和所取组织芯柱能够更好地融合；（3）更好地保留供体组织的抗原性，减少免疫组化染色时的边缘效应。加热恒温装置的引入，解决了传统手工制作时烤蜡块“火候”难以掌握的缺点，在制作芯片过程中无需对供、受体蜡块进行加热，并且在蜡块制成后也不必烤蜡块，就能直接切片，简化组织芯片的制作流程，降低芯片的制作难度，节约了大量的时间和精力。 用自制的组织芯片仪制作的组织芯片各孔排列整齐，大小均匀。与组织芯片制孔器等相比［2］，其优点是可根据需要设计不同孔径的打孔、取样针和调节孔间距，其功能元素可与市售的组织芯片仪相媲美。 【 参考