纳洛酮对海马神经元的预防保护作用.docVIP

　　纳洛酮对海马神经元的预防保护作用 　　【摘要】 目的 为观察缺氧对大鼠海马神经元的影响及纳络酮的保护作用。方法 采用细胞培养方法获取10～14 d的海马神经元，将含药血清加入到培养液中，4 h后建立95%N2+5%CO 2 混合气体急性缺氧模型，胎盘兰染色细胞计数并做流式细胞仪检测以及酶法测定抗氧化酶（超氧化物歧化酶）的抗氧化能力及丙二醛、NO的含量。结果 离体条件下纳络酮可显著增强海马神经元的活性，降低其凋亡率及死亡率；提高细胞上清夜中超氧化物歧化酶的活性，降低丙二醛及NO的含量，且成量效比例关系。结论 纳络酮在体外有抗缺氧损伤的作用。其作用机制可能是通过抑制细胞凋亡，提高抗氧化酶的活力，清除自由基，而发挥作用。 .L.编辑。 　　【关键词】 纳络酮； 缺氧；海马神经元；抗氧化剂 　　 　　【Abstract】 Objective In order to investigate and confirm pal neuronal cells.Mothods The present study used morphological changes and the activities of SOD and rhe contents of MDA and NO as indicators.The morphological changes ethod，The apoptosis rate and death rate of hippocampal neuronal etry（FCM）.The contents of MDA and NO and the activities of SOD in the supernatants of cells ined by biochemical methods.Results The results demonstrated that：in vitro，paring pal neuronal cells，decreased the apoptosis rate and the death rate，increased the activities of SOD and decreased the contents of MDA and NO in the supernatants of cells.Conclusion The above results suggest that：the Nalaxone has the neuroprotective effect on hippocampal neuronal cells against anoxic.The mechanism of this effects of Nalaxone may be mediated by eliminating the free radicals，by increasing the activities of antioxidative enzymes to inhibit the oxidative damages caused by anoxic. 　　【Key pal neuronal cells；Antioxidants 　　 　　脑缺血时机体产生大量的氧自由基，且NO在体内局部浓度升高，与周围的氧自由基等反应而生成活性氮氧化合物，是一种强氧化剂，也可启动脂质过氧化。自由基医学的研究表明，神经元的损伤、凋亡、坏死等与脂质过氧化密切相关，而抗氧化剂可通过清除自由基，提高抗氧化酶等途径有效的阻断或防止这一过程 ［1］ 。近年发现纳络酮还具有非拮抗阿片受体作用，对稳定脑出血后神经元有一定的作用，但目前还缺乏对海马神经元培养的相关实验支持 ［2］ 。本试验体外培养海马神经元，建立急性气体缺氧模型，胎盘兰染色细胞计数并做流式细胞仪检测以及酶法测定抗氧化酶（超氧化物歧化酶）的抗氧化能力及丙二醛、NO的含量。以此来探讨纳络酮在体外是否有抗缺氧损伤的作用，其作用机制是否是通过抑制细胞凋亡，提高抗氧化酶的活力，清除自由基，而发挥作用的。从而来确定纳络酮在脑缺血中的神经元保护作用，并寻求预防和 治疗 脑缺血发生的药物。 　　 　　1 材料与方法 　　 　　1.1 材料 　　1.1.1 实验动物为新生的EM、马血清（Gibco公司），胎牛血清（杭州西季青生物材料工程公司），超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MAD）、一氧化氮（NO）（南京建成生物工程研究所），多聚赖氨酸（Sigma公司）。 　　1.1.3 主要仪器设备 OLYMPUS，BX50，PM-20系统显微镜（日本），PM-6，OLYMPUS解剖显微镜（日本），二氧化碳细胞培养箱（上海福玛实验设备有限公司），YJ超净工作台（垂直单