色谱方法建立的一般步骤.ppt

色谱方法建立的一般步骤 12级-分析化学-刘洁 提纲 色谱仪器的结构 色谱建立的一般步骤 分别介绍各步骤具体内容 分别介绍气相，液相色谱流程、检测器及注意事项 色谱仪器的基本组成 色谱方法建立的一般步骤 根据被分析样品的特性选择适用于样品分析的一种色谱分析方法 选择一根适用的色谱柱 选择适当的或优化分离操作条件 谱图分析[1] 定性分析 根据所得谱图进行分析，在图库中寻找类似谱图，进行定性分析。 定量分析 根据峰面积等理论值与被测物质含量之间的关系进行定量计算。常用定量计算方法有如下几种： 归一化法 内标法 内标标准曲线法 外标法 色谱指纹图谱在中药质量控制中的应用?? 色谱的简单分类 气相色谱-质谱联用技术测定从山羊血清中提取的莰酮 离子色谱-质谱法联用技术测量组织中乙醇酸，2-磷酸乙醇酸的含量 气相色谱分析流程示意图 气相色谱分析方法检测器的种类 氢火焰离子检测器气相色谱测定水中的短链脂肪酸及分离系统的选择 气相色谱分析技术的注意事项 液相色谱分析流程示意图 液相色谱分析方法检测器的种类 紫外光度检测器 荧光检测器 差示折光检测器 电导检测器 液相色谱分析注意事项 用离子排斥高效液相色谱法测定牛奶中乳酸方法的发展与检测 * * 载气系统 进样系统 色谱柱 检测器 记录系统 由于色谱方法的特殊性，其建立的一般步骤大致如下： 1、根据被分析样品的特性选择适用于样品分析的一种色谱分析方法。 2、选择一根适用的色谱柱。 3、选择适当的或优化的分离操作条件 4、由获得的色谱图进行定性分析和定量分析 　1、只要在气相色谱仪允许的条件下可以气化而不分解的物质，都可以用气相色谱法测定。对部分热不稳定物质，或难以气化的物质，通过化学衍生化的方法，仍可用气相色谱法分析。 一般沸点低，350oC,易挥发，热稳定 2、只要能够制成液体的物质均可使用液相色谱法 色谱柱选择 固定相 柱的性质 担体 固定液 温度 长度 内径 流动相的流速 流动相的用量 进样时间 进样量 [1]色谱指纹图谱在中药质量控制中的应用,周建良, 齐炼文, 李 萍,色谱, 2008，mar.Vo.l 26 No. 2 153~ 159 介绍了色谱指纹图谱在中药质量控制体系,即中药真实性鉴定(化学指纹图谱)、有效性评价(谱效学、生物指纹图谱、代谢指纹图谱)以及安全性评价方面的应用。目前化学指纹图谱在中药的真实性鉴定方面已比较成熟; 谱效学、生物指纹图谱和代谢指纹图谱由于与药效活性相关, 在中药的有效性评价中已体现出优势; 色谱指纹图谱在中药的安全性评价方面的应用也愈来愈受到重视。 按照流动相物态分 气相色谱法[2] 液相色谱法 [2]A gas chromatography–mass spectrometry assay to quantify camphor extracted from goat serum, Kyung-Min Leea, Susie Y. Daia,b,?, Timothy J. Herrmana, Jeffrey M.B. Musserb, Journal of Chromatography B, 905 (2012) 133– 136 [3]Glycolate and 2-phosphoglycolate content of tissues measured by ion chromatography coupled to mass spectrometry，John Knight, Mark Hinsdale, Ross Holmes, Analytical Biochemistry 421 (2012) 121–124 液-液色谱法 液-固色谱法 离子交换色谱法 离子对色谱法 离子色谱法[3] 空间排阻色谱法 《色谱B》 建立了用气相色谱-质谱联用技术测定山羊血清中的莰酮的方法。莰酮和内标物（异松油烯 ）在乙酸乙酯做分离液的离子液相色谱中可以看到清晰的分辨峰。实验中基于峰形，信噪比，补偿值，再现性等对洗脱和进样体积进行了优化。该方法的线性相关系数为R2=0.998，线性范围为0.005–10.0 g/mL。该试验样品取自喂食莰酮的山羊血清。 《分析生物化学》 摘要：乙醇酸，2-磷酸乙醇酸（PG）是二碳一元羧酸，其在新陈代谢中的作用尚不明确。除了体液及红细胞中，这两种物质的浓度鲜被提及。本文采用IC-MS方法，用来量化组织中的二者含量。样品制备与分析可在1h内完成。低浓度的乙醇酸和PG都可以被检测到。这种IC-MS的检测