苯酚硫酸比色法测定红毛五加皮多糖的含量.docVIP

　　苯酚硫酸比色法测定红毛五加皮多糖的含量 作者：钟世红，卫莹芳，古锐，黄小雪，谢武超，杨湘 【摘要】 　　目的建立红毛五加皮多糖的含量测定方法，对不同产地样品进行测定。方法采用苯酚-硫酸比色法。结果葡萄糖的线性范围为24.05～54.11 μg /ml，平均加样回收率为97.80 %，RSD为1.59%（n=6）。红毛五加皮的多糖含量为6.83%～24.50%；木心的多糖含量为5.78%～9.21% 。结论该方法快速、准确，可为红毛五加药材的质量控制提供 参考 。建议红毛五加皮多糖含量不得低于10.9%，木心具有一定利用价值。 【关键词】 红毛五加皮　多糖　苯酚-硫酸比色法 　　Abstract：ObjectiveTo determine the content of polysaccharides in cortex acanthopanacis giraldii from different regions.MethodsPhenol-sulfuric acid colorimetry ine the content of polysaccharides. ResultsThe linear range of glucose l. The average recovery ethod is rapid,accurate and can be used for the quantity control of A. Giraldii Harms. The polysaccharides content of bark should not be lo is valuable in some degree. 　　Key etry 红毛五加皮为四川地区的习用药材和岷江上游羌民族特色药材，收载于《四川省中药材标准》1987年版，具有祛风湿、强筋骨、利关节之功效。作为红毛五加中的一类主要有效成分，红毛五加多糖（AGP）已被广泛证实具有提高免疫［1］、抗肿瘤［2］、抗病毒［3］等药理活性。因此，多糖含量是评价红毛五加皮质量的重要指标。本研究建立了以苯酚-硫酸比色法测定红毛五加皮中多糖的方法，并对不同产地样品进行了含量测定，以期为该药材的质量控制提供 科学 依据。 　　 1 仪器与试药 　　1.1 仪器UV1102紫外/可见分光光度计（上海天美）， 电子 天平（Sartorius BS224S 北京）。 　　1.2 试药试剂D-葡萄糖对照品（分析纯，成都市科龙化工试剂厂）。4%苯酚为182℃馏分加蒸馏水配制而成，乙醇、丙酮等试剂均为分析纯。水为蒸馏水。 　　1.3 样品自采或购买，经成都中医药大学卫莹芳教授鉴定为红毛五加Acanthopanax giraldii Harms的干燥茎皮及木心。样品均粉碎为中粉。 　　 2 方法与结果 　　2.1 红毛五加多糖的提取与精制称取红毛五加茎皮粉末60 g，置索氏提取器中，依次用石油醚（60～90℃）、乙醚、80％乙醇回流提取至无色（各约8 h）。残渣挥干乙醇，每次加水800 ml回流提取1 h，共提取4次，趁热过滤，合并滤液，减压浓缩至约200 ml。加95％乙醇使含醇量为80％，搅匀，冰箱中静置过夜，抽滤得粗多糖。加水配成1％粗多糖溶液，Sevage法脱蛋白［4］。加入30％H2O2脱色［5］。所得溶液减压浓缩至约200 ml，加入95％乙醇使溶液含醇量为80％，搅匀，冰箱中静置过夜，抽滤得下层多糖。以无水乙醇、丙酮、乙醚依次洗涤多糖，60 ℃真空干燥，得黄白色的红毛五加精多糖粉末。 　　2.2 供试品溶液制备方法考察称取红毛五加茎皮粉末约1.0 g，共4份，精密称定，置索氏提取器中，加入80%乙醇回流提取至无色。残渣挥干乙醇，每次加水适量回流提取30 min，其中2份提取3次，另2份提取4次，抽滤，合并滤液置500 ml容量瓶中，加蒸馏水稀释至刻度。分别精密吸取各供试品溶液0.8 ml，各加入1.2 ml蒸馏水、4％苯酚溶液1.0 ml，摇匀，加入浓硫酸5.0 ml，40 ℃水浴加热15 min，置冰水中冷却5 min，于487 nm测定吸光度。结果无明显差异。 　　遂确定供试品溶液的制备方法为：精密称取样品粉末约1.0 g，置索氏提取器中，加入80%乙醇回流提取至无色。残渣挥干乙醇，加水适量回流提取3次，30 min/次，抽滤，合并滤液置500 ml容量瓶中，加蒸馏水稀释至刻度，备用。 　　2.3 标准曲线的绘制精密称取105 ℃干燥至恒重的葡萄糖对照品适量，配制成0.30 mg/ml的对照品溶液。分别精密量取该对照品溶液4.0，5.0，6.0，7.0，8.0，9.0 ml置50 ml容量瓶中，加蒸馏水稀释至刻度，备用。再精密量取上述稀释的对照品溶液各2.0