薄层扫描法测定蒙成药乌达巴拉.docVIP

　　薄层扫描法测定蒙成药乌达巴拉 作者：王玉华 赵国丁 钟乃庚 王伟 【摘要】 　　目的建立乌达巴拉-7中胆酸的定量分析方法。方法双波长薄层扫描法。结果线性范围为1.065～5.325 μg，回归方程为Y=10 073.664X-2，r=0.999 1。在线性范围内，实验结果的精密度和重复性良好。平均回收率为99.1%, RSD为 0.91%（n=5）。结论该方法简便、灵敏、准确，可用于乌达巴拉-7中胆酸的含量测定。 【关键词】 乌达巴拉-7 胆酸 薄层扫描法 　　Abstract:ObjectiveTo establish a method for determination of cholic acids in ethodsDouble ethod ployed.Results The linear range ethod ethod is simple, sensitive and accurate, ine the content of cholic acids in CNa：硅胶G（3∶1）湿法铺板，厚度为0．5 mm，晾干，于110℃活化1 h备用。 　　2.1.2 展开剂异辛烷－醋酸乙酯-冰醋酸-甲酸（8∶4∶2∶1）。 　　2.1.3 显色剂喷10%的硫酸乙醇溶液，105℃加热显色。 　　2.1.4 扫描方式反射法锯齿扫描，SX=3，狭缝1.2 mm×1.2 mm。 　　2.1.5 测定波长与参比波长的选择将显色后的斑点在400～700 nm范围内作光谱扫描，见图1。由图1确定胆酸斑点的测定波长和参比波长分别为：λs= 470 nm，λR= 650 nm。 　　图1 胆酸斑点的光谱扫描图（略） 　　2.2 提取条件的选择胆酸易溶于甲醇中， 故选择甲醇做为提取溶剂。 进一步将样品进行了如下的净化处理：将甲醇提取液过滤，精密吸取续滤液一定体积，蒸干，用碱回流提取，将碱回流提取液酸化，用醋酸乙酯提取，提取液蒸干，残渣加甲醇溶解定容。 　　2.3 溶液的制备 　　2.3.1 胆酸对照品溶液的制备取胆酸对照品约 5 mg，精密称定置 5 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得（每毫升中含胆酸 1 mg）。 　　2.3.2 供试品溶液的制备 取本品细粉约0.4 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50 ml，密塞，称重，超声处理30 min，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25 ml，蒸干，残渣加20%NaOH溶液10 ml，加热回流2 h，冷却，加稀盐酸19 ml调节PH至酸性，用醋酸乙酯提取4次(25，25，20，20 ml ),每次醋酸乙酯液均通过同一铺有少量无水硫酸钠的脱脂棉滤过,合并提取液,蒸干,残渣加甲醇溶解并转移至10 ml量瓶中, 加甲醇至刻度,摇匀,作为供试品溶液。 　　2.4 线性关系考察用定量毛细管吸取1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 μl 胆酸对照品溶液（浓度为 1 mg/ml ）点于同一硅胶G薄层板上，按上述条件展开，定位，扫描，以斑点面积积分值对点样量（μg）之间做回归分析，用最小二乘法求得回归方程为Y=10 073.664X-2，r=0.999 1（Y为吸收度积分值，X为标准品的量：μg）。线性范围：1.065 ～5.325 μg。 标准曲线见表1和图2。 　　表1 标准曲线测定的数据表（略） 　　图2 胆酸测定的标准曲线（略） 　　2.5 精密度实验 　　2.5.1 同板精密度实验 在硅胶G薄层板上点供试品溶液3 μl，点5个点，按上述条件展开，显色，分别测定各斑点的积分值。结果见表2。 　　2.5.2 异板精密度实验 取5张硅胶G薄层板，分别点供试品溶液3 μl，按上述条件展开，显色，分别测定各板上斑点的积分值。实验结果见表3。 　　表2 同板精密度实验结果（略） 　　表3 异板精密度实验结果（略） 　　结果表明，方法的精密度良好。 　　2.6 稳定性实验 将以上精密度实验的斑点分别于0，2，4，6，8 h进行扫描测定。结果见表4。结果表明，在6 h内的积分值基本稳定。 　　表4 稳定性实验结果（略） 　　2.7 重复性实验 取同一批号乌达巴拉-7供试品5份，每份取样量约0.4 g，精密称定，分别按“溶液的制备”项下方法制备对照品溶液和供试品溶液。吸取供试品溶液3 μl，对照品溶液1 μl和3 μl，分别交叉点于同一硅胶G薄层板上，以异辛烷醋酸乙酯冰醋酸甲酸（8∶4∶2∶1）为展开剂，取出，晾干，喷10%的硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点清晰。照薄层扫描法［2］进行扫描，波长为λs=470 nm，λR=650 nm。测量供试品与标准品的吸收度积分值， 计算 ，即得。结果见表5。 　　表5 重复性