血管平滑肌细胞的增殖及西洋参叶二醇组皂苷的干预作用.docVIP

　　血管平滑肌细胞的增殖及西洋参叶二醇组皂苷的干预作用 作者：邵伟 袁晓波　王智昊 赵学忠 【摘要】 目的 观察西洋参叶二醇组皂苷（PQDS）对增殖的血管平滑肌细胞（VSMC）的干预作用，探讨PQDS干预VSMC的增殖作用及机制。方法 组织贴块法培养大鼠胸主动脉VSMC，用AngII诱导VSMC增殖。随机分为：空白对照组、AngⅡ模型组、AngⅡ+PQDS 100、50、25 mg/L不同剂量组。用MTT法、流式细胞术观察PQDS对细胞增殖、细胞周期、增殖指数的影响。结果 PQDS可减低VSMC的增殖能力，将增殖的VSMC抑制在G0/G1期。结论 PQDS能抑制VSMC增殖，其机制可能与将增殖的VSMC抑制在G0/G1期有关。 【关键词】 西洋参叶二醇组皂苷；血管平滑肌细胞；血管紧张素II 冠状动脉粥样硬化（AS）的主要病理变化是血管平滑肌细胞（VSMC）的增殖〔1,2〕。诱导VSMC增殖因素有很多，其中较重要的因素为血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）。AngⅡ是肾素血管紧张素系统（RAS）中重要的生物活性肽，经过一系列细胞信号转导可诱导细胞增殖〔3〕。西洋参叶二醇组皂苷（PQDS）是五加科人参属植物，有抗心肌缺血、缩小心肌梗死面积的作用〔4〕。目前尚未有 　　 2 结 果 　　2.1 VSMC的鉴定 　　用倒置相差显微镜和SMA免疫组化染色，对VSMC进行鉴定。细胞培养3～5 d后，用相差显微镜观察可见少量细胞自组织块边缘游离出来，细胞呈梭形或长梭形排列，然后细胞呈放射性生长，长轴与组织块边缘垂直，多为两极，胞浆均匀，可见圆形细胞核及分裂相。至培养10 d左右出现局部成束的细胞平行排列，部分区域细胞重叠，部分区域高低起伏呈“峰、谷”状生长。SMA染色发现gt;98%的细胞染色呈阳性，即细胞浆内呈现棕黄色反应，胞核不着色，表明细胞含有SMA，证明培养的细胞为VSMC。见图1。 　　2.2 PQDS对VSMC增殖能力的干预 　　AngⅡ模型组OD值(0.862 5±0.06)比空白对照组(0.791 3±0.04)明显升高（Plt;0.05），提示AngⅡ可促进VSMC的增殖，造模成功。PQDS高、中剂量组OD值(0.773 8±0.05，0.807 5±0.03)比AngⅡ模型组均显著降低（Plt;0.05），PQDS低剂量组(0.812 5±0.06)有下降趋势，但是没有统计学意义（Pgt;0.05），提示PQDS能够抑制VSMC增殖。 　　2.3 PQDS 对VSMC的细胞周期及PI的干预 　　AngⅡ模型组较空白对照组G0/G1期VSMC百分率明显减少（Plt;0.05），S期、G2/M期VSMC百分率显著增加（Plt;0.05），增殖指数明显升高（Plt;0.05）。提示AngⅡ可以促进VSMC从G1/G0期向S期转化，诱导VSMC增殖，造模成功。PQDS药物组较AngⅡ模型组G0/G1期的VSMC百分率均显著增加（Plt;0.05）；S期的VSMC百分率、增殖指数均显著减少（Plt;0.05）；PQDS高、中剂量组G2/M期VSMC百分率显著降低（Plt;0.05），低剂量组G2/M期百分率降低，但没有明显差异（Pgt;0.05）。上述结果显示PQDS干预AngⅡ诱导的VSMC增殖，主要将细胞抑制在G1/G0期，见表1。表1 PQDS对细胞周期及增殖指数的影响(略) 　 　3 讨 论 目前临床上抑制VSMC增殖的药物有钙离子拮抗剂、β受体阻断剂、血管紧张素转换酶抑制剂、免疫抑制剂雷帕霉素、降脂药普罗布考等〔5〕，但抑制VSMC增殖的中药开发得较少。中药是祖国医药的神奇宝藏，在中医整体理论的指导下，可发挥多靶点、多成分协同作用的优势，疗效显著、价格低廉、毒副作用小。因此，开发抑制VSMC增殖的安全有效的中药及探讨抑制VSMC增殖的机制有重要意义。 　　AngⅡ是肾素血管紧张素系统中最重要的生物活性肽，不仅是血管活性物质引起机体血流动力学改变，而且通过自分泌、旁分泌刺激VSMC增殖〔6〕。本实验用AngⅡ诱导VSMC增殖，MTT法观察到AngⅡ模型组OD值比空白对照组明显增高，说明AngⅡ促进VSMC增殖，表明实验造模成功。本文通过流式细胞仪技术，发现AngⅡ 使G0/G1期的VSMC百分率明显减少，S期、G2/M期的VSMC百分率明显增加。证实AngⅡ促使VSMC从G0/G1期进入到S期、G2/M期，诱导细胞增殖。 　　西洋参茎叶皂苷（PQS）系五加科人参属植物，包括PQDS和三醇组皂苷等。研究证明PQDS可增加急性心肌梗死犬心肌血流量，降低冠脉阻力，明显降低心肌耗氧量、心肌氧摄取率及心肌耗氧指数〔7〕，可增加小鼠心肌 Rb摄取率，增加心肌营养性血流量〔8〕，可明显缩小心肌梗死面积，减少血清