哮喘患者特异性免疫治疗中检测NK 细胞活性的临床意义.docVIP

　　哮喘患者特异性免疫治疗中检测NK 细胞活性的临床意义 【摘要】 目的探讨在哮喘尘螨特异性免疫 治疗 中 自然 杀伤（NK）细胞活性的临床意义。 方法 分别检测尘螨过敏的哮喘患者85例，正常对照组30例成人NK细胞活性，并对哮喘患者进行尘螨特异性免疫治疗，治疗前后检测其NK细胞活性及总IgE。结果哮喘患者的NK细胞活性比正常对照组显著减少（Plt;0.01），总IgE显著降低（Plt;0.01）。 结论NK细胞参与哮喘的发病过程，是一种重要的免疫调节细胞。 特异性免疫疗法有助于NK细胞活性增强，降低总IgE水平，从而减少哮喘的发作。 【关键词】 自然杀伤细胞 哮喘 特异性免疫治疗 　　Abstract： ObjectiveTo discuss the importance of the activity of nature killer (NK) cells in the patients a during immunotherapy. MethodsDetection atophagoides farinae and in 30 normal subjects so that thEir NK cell activity could be pared. Besides, all the patients and the normal subjects atophagoides farinae immunotherapy, before and after al subjects (Plt;0.01) and so a, act as a kind of important immunity regulator. Immunotherapy is helpful to strengthening NK cell activity and reducing total IgE level. Thus it may reduce the occurrence of asthma. 　　Key a; immunotherapy 　　尘螨过敏性哮喘为最常见的过敏性哮喘。我们采用LDH释放法检测尘螨过敏的哮喘患者在特异性免疫治疗前后外周血自然杀伤细胞（natural killer cell, NK）活性， 以探讨特异性免疫疗法中NK细胞活性的变化及意义。 　　1资料和方法 　　1.1病例选择 　　选择2002年3月—2007年5月我院哮喘门诊就诊的哮喘尘螨过敏者85例进行尘螨特异性免疫治疗。其中男55例，女30例；年龄16~45岁，平均（20.43±3.60）岁。 所有病例均符合以下特点：（1）有典型的哮喘发作和出现症状有明显季节性与可逆性； （2）发作时可闻及哮鸣音；（3）用支气管扩张药后气喘缓解、哮鸣音消失； （4）排除慢性支气管炎及慢性阻塞性肺气肿；（5）至少有尘螨过敏且结果在++以上。 正常对照组共30例，其中男17例，女13例；年龄 16~40岁， 平均（22.32±1.81）岁。 两组之间的年龄、性别差异无统计学意义（Pgt;0.05）。 　　1.2试验方法 　　1.2.1尘螨过敏原皮试尘螨皮肤点刺液试剂盒购自上海旭东海普药业有限公司。 用乙醇消毒前臂掌侧皮肤， 设立阴性、阳性对照，点刺针蘸取阴性对照、阳性对照和尘螨点刺液点入前臂皮肤， 每2滴间距离不lt;5 cm 以防止红晕互相融合。 15 min 后观察反应情况，反应比值大于阳性对照丘疹或红晕25%者为阳性。 　　1.2.2NK细胞活性检测效应细胞的制备： 肝素抗凝静脉血3 ml，以PBS液2：1稀释，按常规以淋巴细胞分离液分离淋巴细胞，以RPMI1640洗2次，将细胞数调至所需浓度备用。 靶细胞的配置：细胞系K652， 用含10%小牛血清的RPMI1640连续传代， 取传代1~2 d 靶细胞按效应细胞洗涤法洗涤, 最后调整细胞数至所需浓度备用。 细胞毒实验: 试验设NK试验管、自然释放管及最大释放管，用NP40（Nonidet P40， Huka AG）破坏靶细胞作最大释放， 分别加样于96孔酶表板中，37 ℃ 含5%CO2孵箱培养2 h， 然后在孔内加入LDH底物混合液（INT+PMS+辅酶Ⅰ）， 在酶标仪490 nm 波长下读数。NK细胞活性 计算 ：自然杀伤率（%）=（测定管-自然释放管）/（最大释放管-自然释放管）×100%。 　　1.2.3总IgE的检测用同位素放射免疫方法。 　　1.3特异性免疫治疗方法 　　85例尘螨过敏患者进行特异性免疫治疗。 粉尘螨注射液购自上海旭东海普药业有限公司。粉尘螨注射液分别为1：105、1：104、1:103、1:500四种剂型，先用1:105剂量按0.1、0.2、0.3至1.0 ml 递增，上臂外侧皮下注