基于脂肪干细胞I型胶原凝胶PLGAβTCP支架的新型仿生骨组织工程复合体的构建及生物学性能.docVIP

　　基于脂肪干细胞I型胶原凝胶PLGAβTCP支架的新型仿生骨组织工程复合体的构建及生物学性能 作者：郝伟，胡蕴玉，姜明，吕荣，王军，赵廷宝 【摘要】 目的：尝试构建基于脂肪干细胞、I型胶原凝胶以及PLGAβTCP支架的新型仿生骨组织工程复合体，并对其生物学性能进行 研究 . 方法 ：取3 mo龄日本大耳白兔皮下脂肪，获得脂肪干细胞，经体外成骨诱导分化鉴定后使用I型胶原凝胶将其悬浮并与三维多孔支架PLGAβTCP复合，从而构建成脂肪干细胞I型胶原凝胶/PLGAβTCP骨组织工程复合体，体外成骨诱导培养2 cells (ADSCs) into a porous PLGAβTCP scaffold (rADSCsCOL/PLGAβTCP) and explore its potentiality for bone tissue engineering. METHODS: ADSCs the suprascapular site of Japanese edium. The n the rADSCsCOL/PLGAβTCP posite edium for 2 icroscopy (SEM). Cell proliferation, alkaline phosphatase activity and calcium deposit ined to fully evaluate the osteogenic differentiation of rADSCs in both posites. RESULTS: By presuspended in collagen I gel, the rADSCs ore, collagen I gel remarkably promoted the osteogenic differentiation of rADSCs in PLGAβTCP scaffold. CONCLUSION: The successful fabrication of rADSCsCOL/PLGAβTCP posite casts a ne cells; collagen I gel; PLGAβTCP; bone tissue engineering 　　0 引言 　　生物支架材料是骨组织工程研究中的一个重要环节［1］. 目前 常用的生物材料例如高分子聚合物、生物陶瓷等，在与种子细胞复合过程中仅仅能够起到机械性支架作用，而缺乏生物活性，在与种子细胞复合以后，难以与其形成良好互动，对其进一步的增殖、成骨分化施加积极 影响 . 而I型胶原作为骨组织中主要的有机成分，在骨形成过程以及维持正常骨结构中发挥了重要作用［2］. 为此，我们从仿生学角度考虑，初步尝试利用I型胶原凝胶悬浮脂肪干细胞（adiposederived stem cells, ADSCs）与三维多孔支架PLGAβTCP复合构建一种新型仿生骨组织工程复合体，并对其生物学性能进行研究，以探讨将其 应用 于骨缺损修复的可行性. 　　1 材料和方法 　　1.1 材料 3 mo龄成年日本大耳白兔，由第四军医大学实验动物中心提供；DMEM培养基、地塞米松、抗坏血酸、β甘油磷酸钠、Ⅰ型胶原酶、磷酸对硝基苯酚（PNPP）、对硝基苯酚（PNP）均购自SIGMA公司；胎牛血清购自杭州四季青公司；碱性磷酸酶检测试剂盒购自上海仁宝试剂公司；细胞外钙定量检测试剂盒（Calcium C kit, EM）重新悬浮、接种. 待细胞达90％汇合时用2.5 g/L胰蛋白酶消化传代. 　　1.2.2 rADSCs的成骨诱导分化鉴定 采用第3代rADSCs，以105个/孔接种于6孔板，待其完全贴壁后于普通培养液中加入10-7 mol/L地塞米松、抗坏血酸50 mg/L和10 mmol/L β甘油磷酸钠进行成骨诱导，4 ）. 　　1.2.4 I型胶原凝胶溶液的制备 将I型胶原用100 mL/L，V/V醋酸溶解并定容至50 mg/L，然后将其以10∶1∶1的比例与10×的DMEM及胎牛血清混合，最后使用1 mol/L NaOH调整溶液pH至7.4. Co60消毒灭菌，置于4℃备用. 　　1.2.5 rADSCsI型胶原凝胶/PLGAβTCP骨组织工程复合体的构建（rADSCsCOL/PLGAβTCP） 使用第3代rADSCs，待其达100％汇合后2.5 g/L胰蛋白酶消化、离心，于冰浴条件下使用100 μL I型胶原凝胶溶液以2×109个/L的密度悬浮细胞并均匀滴加于PLGAβTCP支架材料孔隙中，37℃作用0.5 h以使胶原凝胶溶液凝结. 最后加入成骨诱导培养液于37℃ 50 mL/L CO2条件下进行成骨诱