携带人脂联素基因重组腺病毒的构建及表达.docVIP

　　携带人脂联素基因重组腺病毒的构建及表达 作者：陈闽 何姜 刘小莺 黄敬泽 王林曦 刘礼斌 【摘要】 　　目的 构建携带人脂联素基因的重组腺病毒载体，为进一步研究脂联素的功能提供实验基础。 方法 以带有人脂联素基因的质粒pINCYAPM1为模板，聚合酶链反应扩增人脂联素基因APM1，并将其定向克隆于真核表达载体pDC315EGFP，与辅助质粒pBHGlox⊿E1，3Cre共转染HEK293细胞，经位点特异重组包装得到重组腺病毒AdAPM1。通过Realtime PCR和1感染HEK293细胞后的表达。 结果 重组腺病毒AdAPM1包装成功，病毒滴度gt;6.3×1012pfu/mL。Realtime PCR和1在HEK293中表达。 结论 应用细胞内同源重组方法成功构建了携带人脂联素基因的重组腺病毒。 【关键词】 胞间信号肽类和蛋白质类 基因 转染 腺病毒科 　　脂联素亦称Acrp30(30 KDa脂肪补体相关蛋白)、GBP28(28 KDa凝胶结合蛋白)、APM1(脂肪组织最丰富的基因转录产物)等，是由Scherer等人于1995年从诱导分化的鼠脂肪细胞中最早发现的具有244个氨基酸的多肽[1]。由于其具有改善胰岛素抵抗、促进血浆游离脂肪酸氧化、抗动脉粥样硬化等作用而成为近年研究的热点[24]。本研究旨在体外构建人脂联素基因腺病毒载体及检测其表达，