DNA的复制预案.ppt

第四章 DNA的复制 Chapter 4 DNA Replication 第四章 DNA 复 制DNA Replication 1 引言---基因组复制与细胞分裂的关系 2 复制子 3 DNA复制的几种形式 4 DNA聚合酶 5 原核生物DNA复制的基本过程 6 真核生物DNA复制 7 DNA复制的调控 8 小 结 重点内容： ①几个重要概念：DNA的复制、复制子、复制眼、复制叉、DNA聚合酶、DNA的半保留复制、DNA的半不连续复制、DNA的先导链、DNA的后随链、冈崎片段；②不同生物基因组复制子数目；③线性DNA复制末端问题的提出及解决方案；④θ-复制、滚环复制及D-环复制的机制；⑤大肠杆菌DNA聚合酶 I、II、 III 的性质比较，DNA聚合酶Ⅰ与缺口平移法制备探针；⑥DNA复制的起始、延伸及终止。 了解内容： ①基因组复制与细胞分裂的关系；②复制叉移动方向的确定；真核生物DNA聚合酶的种类及各自的功能；③DNA复制的调控。 1 引言---基因组复制与细胞分裂的关系 细胞在每次分裂的过程中，整个基因组都必须精确地复制一次。 如何保证这一点？两个原则 (1) DNA复制的启动决定了细胞的进一步分裂; (2) 复制过程完成前，细胞是不会发生分裂的。 2 复制子(replicon) 2.1 复制子的定义 2.2 不同生物复制子的数目 2.3 复制眼概念 2.4 复制叉概念及其移动方向的实验确定 2.5 复制的模式---起点、方向和速度 2.1 复制子的定义 DNA中发生一次复制的单位称为复制子(replicon) 。 复制子是根据它含有复制所需的控制元件来定义的，在复制启动位点具起始点（origin)，在复制终止位点具终点（terminus)。起始点仅作用于所在复制子。 注：在每个细胞周期中，每个复制子发生一次复制，且只发生一次。 质粒一般是一个自主环状的DNA基因组，构成一个独立复制子； 原核生物基因组中一般只含一个复制子，在唯一的起始点启动就会引起整个基因组复制； 真核生物基因组含多个复制子（一般40-100kb/个）。 2.3 复制眼概念 复制叉移动方向的确定 3 DNA复制的几种形式 3.1 线性DNA双链的复制 3.2 环状DNA双链的复制 3.1 线性DNA双链的复制 3.1.1 线性DNA复制的具体表现 3.1.2 线性DNA复制时末端问题的提出 3.1.3 线性DNA复制时末端问题的解决方案 3.1.1 线性DNA复制的具体表现 3.1.2 线性DNA复制时末端问题的提出 3.1.3 线性DNA复制时末端问题的解决方案 (1）通过将线性复制子转变为环状或多聚分子。如λ噬菌体：滚环产生多聚复制子）； (2）某种蛋白质可能会介入，在真正的末端上启动。几种线性病毒核酸具有与5`端碱基共价结合的蛋白质，其中了解最清楚的例子是腺病毒 DNA )。 (3）DNA可形成特殊的结构，如在末端形成发夹。使分子没有游离末端。草履虫（Paramecium）的线性线粒体DNA的复制中就形成了一种交联； (4）末端是可变的，而不是精确确定的。真核生物染色体可能采用这种方式，在这种情况下，DNA末端的短重复序列的拷贝数改变（如端粒的复制）； （1）通过将线性复制子转变为环状或多聚分子 （2） 某种蛋白质介入而在真正的末端启动复制 （4） 末端长度可变 Watching flash 3. 2 环状DNA的复制 3.2.1 θ-复制 replication by θ-structure φX174噬菌体由一个单链环状DNA组成，这条链称为正（+）链；合成的互补链称为负（一）链。双链体的复制以滚环复制方式进行。 4 DNA聚合酶 （1）DNA聚合酶 I 103 kDa的单链多肽，可以被蛋白酶切成两段，C端的2/3包括聚合酶活性位点；N端的1/3包含核酸外切酶校正活性（一次可切除1-10个碱基）。 （2） 利用DNA聚合酶 I 进行缺口平移法制备探针的基本原理 真核生物由不同DNA聚合酶分别负责起始和延伸 三种细胞核DNA复制酶具有不同的功能: DNA polymerase α 起始新链合成 DNA polymerase δ 延伸先导链 DNA polymerase ε 可能与后随链合成有关，也可能具有其他功能 4.3 DNA聚合酶所具有的共同结构 许多DNA聚合酶有一个由三个结构域组成的大裂隙，类似于手形。 5 原核生物DNA复制的基本过程 5.1 DNA复制的起始 5.1.1 单链DNA的产生 5.1.2 3`-OH引发末端