克拉维酸钾中有关物质的HPLC-ESI-MS分析.docVIP

　　克拉维酸钾中有关物质的HPLC/ESI/MS分析 【摘要】 目的 检查并推证克拉维酸钾中有关物质。方法 采用HPLC/ESI/MS液质联用技术，液相色谱条件为：色谱柱C18(250mm×4.6mm，5μm)；柱温40℃；流动相A为0.01mol/L乙酸铵，流动相B为流动相A和乙腈(1∶1)混合物；流速1ml/min；柱后分流1∶1；检测：UV230；线性梯度洗脱。质谱条件：离子源：ESI；检出模式：正负离子二种形式；扫描范围：50～800m/z；电离电压：3.0kV；电喷雾接口干燥气(N2)流速318L/h；离子源温度150℃；锥孔电压30V。结果 从克拉维酸钾中分离鉴定出6种有关物质，其中3种与欧洲药典列举的有关物质相同。结论 克拉维酸钾在生产过程中生成多种有关物质，该方法为研究和鉴定克拉维酸钾中有关物质及其来源，提高药品质量和安全性提供了技术支持。 【关键词】 克拉维酸钾； 液质联用技术； 有关物质 ABSTRACT Objective To analyze the related substances in clavulanate potassium. Methods HPLC, electrospray ionzation and selective ion monitoring mass spectrum method n C18 (250 mm × 4.6 mm, 5 μm), temp: 40 ℃, mobile phase: A) 0.01 mol/L ammonium acetic; B) mixture of mobile phase A and acetonitrile (1∶1); flol/min; postcolumn split ratio: 1∶1; detection: UV 230nm; elute by linear gradient. MS parameter: ion source: ESI(+); 50～800 m/z; ionization voltage: 3.0 kV; dry gas (N2) flop:150 ℃; emale cone voltage: 3.0 kV. Results Six related substances . HPLC/ESI/MS provided an effective method to determine the related substances and ensure the quality and safety of the product. KEY ass spectrometry; Related substances 克拉维酸钾(clavulanate potassium)是由棒状链霉菌(Streptomyces clavuligerus)产生的一种β内酰胺酶抑制剂，它与该酶可发生不可逆的结合使酶失活［1］。克拉维酸钾的化学性质不稳定，在生产和储存过程中容易发生化学变化，引入杂质。根据“人用药品注册技术规范的国际协调会”(ICH)的要求，超过0.1%的杂质需鉴定出来并且用选择性好的方法进行定量分析，在欧洲药典中已经列举了克拉维酸钾中部分有关物质的化学结构［2］。 由于生产菌种、原料和工艺路线的不同，国内生产的克拉维酸钾所含的有关物质不一定与欧洲药典列举的相同，为提高药品质量，保证用药安全性，需要对克拉维酸钾中有关物质进行研究确定。色谱质谱联用技术(ChromatographyMass Spectrometry)是当代重要的分离和鉴定分析方法之一，广泛应用于医药研究领域［3］。液相色谱具有高效的分离性能；而质谱具有高灵敏度和高选择性，能为结构定性分析提供较多的信息。因此本研究选用HPLC/ESI/MS的方法对克拉维酸钾的有关物质进行检测分析。 1 仪器与材料 仪器 Agilent 1100高效液相色谱仪，含在线真空脱气机、四元梯度泵、自动进样器、柱温箱、二极管矩阵检测器(DAD)；API 4000 LC/MS/MS system。 试剂与试药 乙腈为色谱纯试剂(TEDIA公司，美国)；乙酸铵为分析纯试剂；水为超纯水；克拉维酸钾原料(批由本公司生产。 2 克拉维酸钾有关物质测定 2.1 样品处理 精密称量克拉维酸钾原料药适量，用0.01mol/L乙酸铵超声溶解并稀释成10mg/ml的溶液，进样前用0.01mol/L乙酸铵稀释1000倍，经0.45μm滤膜过滤后上样。 2.2 液相色谱条件 色谱柱C18(250mm×4.6mm，5μm)；柱温40℃；流动相A为0.01mol/L乙酸铵，流动相B为流动相A和乙腈(1∶1)混合物；流速1ml/min；柱后分流1∶