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电子舌与连接电化学检测器的高效液相色谱技术 （HPLC）在识 别培养基中的霉菌时的应用 1200013203 康磊 城市与环境学院 主要参考文献：C. Söderström, H. Borén, C. Krantz-Rülcker, Use of an electronic tongue and HPLC with electrochemical detection to differentiate molds in culture media, International Journal of Food Microbiology, 2005, 97, 247– 257. 摘要 作者采用两种方法测定不同培养基上繁殖的霉菌的代谢产物：（1）使用具有四支工作 电极的电子舌，运用脉冲伏安法检测代谢产物；（2 ）使用HPLC 分离产物，以UV 检测器和 EC 检测器分别检测分离得到的物质。对得到的数据，作者通过主成分分析 （PCA ），证明了 电子舌与HPLC 均具有分离代谢产物的作用，分离模式一致性好。不同霉菌种类与培养基种 类之间，霉菌代谢产物存在显著差异。此外，用UV 探测器与EC 探测器得到的HPLC 色谱 峰不一致。 关键词 电子舌 HPLC 霉菌 脉冲伏安法 代谢 一、 引言 目前，对不同培养基中微生物代谢活性的在线监测方法较为缺乏，尤其是对食品中霉菌 的生长的测定存在空白。Linköping 电子舌是一种运用脉冲伏安法的工作原理，通过不同金 属工作电极对体系的反应，来对反应进程进行实时报告的电极系统。在电子舌工作时，根据 常规脉冲伏安法的原理，加以逐渐增大的脉冲式电压，测定电流，以得到待测物质的浓度。 该项技术目前已应用于水质监测，如pH 、COD 的监测。 为考察电子舌技术在监测微生物代谢活性中的应用前景，作者选用 HPLC 作为参比方 法。使用HPLC 时，采用UV 检测器与EC 检测器，前者的检测普适性更强，后者仅对具有 电化学活性的物质产生响应。 评价电子舌的监测效果时，作者采用主成分分析 （PCA ），将差异小的数据归类，找出 区分不同数据组的变量。根据上述原理及工作，作者假设电子舌可以分辨在生长中的霉菌的 不同代谢产物，以及代谢产物在不同培养基或不同菌种下的差异性。 二、 实验材料与方法 1. 培养基与霉菌材料 实验中，使用三种不同液体培养基培养霉菌：培养基1 为半合成培养基，碳源为麦芽提 取物；培养基2 与培养基3 为合成培养基，二者的差异在于使用的碳源不同，培养基2 使用 葡萄糖作为碳源，培养基3 使用蔗糖作为碳源。使用两类霉菌进行培养：黄曲霉与团青霉。 2. 电子舌 实验中使用的电子舌系统包括四支工作电极，一支Ag/AgCl (3M KCl)参比电极以及一 支不锈钢助电极，使用三电极系统连接方式连接电子舌。四支工作电极分别使用Au 、Ir、Pt 、 Rh 金属丝作为电极材料，镶嵌于牙科复合材料上，仅暴露部分表面，之后置于不锈钢助电 极管中，参比电极镶嵌于工作电极系统的中心。电极系统与外电路相连，工作时外电路为电 极系统提供阶梯间断式的脉冲电压。 3. HPLC 系统 实验中HPLC 使用的流动相组成如下：1 gKNO ，0.05 g KCl ，10 μLHCl ，900 mL 去离 3 子水以及100 mL 甲醇。HPLC 使用Zorbax Eclipse XDB-C8 柱作为色谱柱，进样量为25 μL， 在0.7 mL/min 流速及20 ℃柱温下进行分离，分别用UV 检测器与EC 检测器检测产物的组 成。 4. 代谢产物的测定 霉菌在培养1d、3d、7d 以及10d 后，分别取少量样品，使用两种方法进行测定。使用 电子舌测定时，可直接对未过滤样品进行测定。使用HPLC 测定时，需经过0.22 μm Millex- GV 过滤器过滤后进行测定。 三、 实验结果与讨论 1. HPLC 测定结果 使用HPLC-EC 技术测定代谢产物，与培养基的HPLC-EC 谱图进行对比，可发现三类 培养基中均出现了原先不存在的电化学活性物质，且电化学活性物质的浓度随培养时间的增 加而升高。培养10d 后不同培养基与培养前的HPLC-EC 谱图对比如下 （其他培养