电位法检测 DNA 杂交.pdfVIP

电位法检测DNA 杂交 王鑫 1300011810 （化学与分子工程学院 100871） 摘 要 本文中，作者与他的研究团队使用Cd2+选择性微型电极来进行DNA 杂交的电位 法检测。为便于检测，先让待测DNA 分子与一级探针杂交，再与二级探针杂交形成夹心 式杂交，然后根据二级探针上的标记来进行检测。这种高选择性高灵敏度的检测手段具有 一定的推广意义和研究价值。 关键词 检出限；DNA 杂交；夹心式杂交；Cd2+选择性微型电极 1 引言 大量基础性研究的进展使得离子选择性电极 （ISEs ）的性能得到巨大提高。而对于电位 传感器检出限控制机理的深入研究使 ISEs 能够达到次纳摩尔级的精度。最近的研究也表明 检出限较低的电位传感器能够微型化，以支持小体积样品 （微升）中的痕量（次飞摩尔级） 检测。ISEs 的性能方面取得如此重大的进展，也让电位传感器有了更为宽广的用途。例如， 可以利用不同的ISE 变换器，进行高灵敏度的蛋白质免疫分析。 2 实验部分 首先谈谈微型电位检测传感器在监测DNA 杂交方面的应用。在遗传病的临床诊断和治 疗、传染性病原体的检测、药物筛选和法医学等方面，特定序列 DNA 的检测十分重要。人 们运用了光学、电化学以及压电诸多手段来检测序列选择性 DNA 杂交。其中，电化学方法 测定 DNA 杂交受到了相当大的关注，因为它灵敏度高、轻便、成本低、电量需求最小、样 品浊度和光学通路独立。利用含酶标记、氧化还原指示剂或是纳米标签（比如纳米金颗粒、 银标签和半导体纳米晶体）的低聚核苷酸，各种电化学伏安法检测策略被用于检测 DNA 杂 交。 一种新的电位检测方法依赖于一种夹心式DNA 杂交。如图1 所示，待测DNA （60mer ） 与被固定在金基质上的巯基化的DNA 探针（20mer ）杂交，再与CdS 标记的二级DNA 探针 （26mer）杂交。然后CdS 纳米晶体在H O 中溶解产生稀的电解质背景溶液，再用Cd2+离子 2 2 选择性聚合物薄膜微电极来检测释放出的Cd2+ 。 图1 利用纳米颗粒的检测DNA 杂交的电位法流程图 这种分析方法依赖于一种微型化的固体接触的Cd-ISE，它在100mL 和200 μL（微孔板） 2+ -10 -9 样品中对 Cd 的检出限分别为 10 和 10 M 。它对有关离子表现出了杰出的选择性，其选 2+ + + 择性系数的对数为-7.04 （Ca ），-3.88 （H ），-4.59 （Na ）。其中，一个微型化的液体接 触的Ca-ISE 作为假参比电极。 DNA 夹心式杂交分析中的关键参数按照下述方式完善：一级和二级 （CdS 标记）DNA 探针的最佳浓度为1 μM，两个杂交步骤的最佳时间都为60min。 -4 这种DNA 检测方法的选择性较高，如图2 所示，200 μL 的10 M CaCl 溶液中进行电位 2 检测，以Ca-ISE 作假参比电极，Cd2+选择性微型电极的电位响应值：（a ）为对照溶液（不含 待测DNA），（b）500nM 非互补DNA，（c ）500 μM 的二碱基错配DNA，以及两个更低浓度的 （d）10nM 和 （e）100nM 的待测DNA。非互补的和二碱基错配DNA 的响应值与对照溶液得到 的结果相似。大量过剩的（500nM）错配DNA （c）与10nM 的待测DNA （d）能进行有效地区 分。这种现象表明该杂交分析选择性较好。考虑Cd-ISE 响应值的对数，2.8nM 对应于500nM 的二碱基错配DNA （c ），21nM Cd2+对应于10nM 待测DNA （d ），电位差与之相符，这表明 少于8 倍的标记DNA 杂交数量对应于超过二碱基错配D