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采用大比表面积的超交联化聚合物毛细管整体柱对小 分子的高效分离 张鑫 1300011829 （北京大学化学与分子工程学院 北京 100871） 摘要 原文献（以下称本文）探讨了大比表面积的超交联化聚合物整体柱的制备与表征，以及分离效果，对比分析了超交联化对于不同分析的优劣。本文作者测得整体柱表面积达663m2/g，比前驱柱测量出来大一个数量级多。因为它有中孔，这个整体柱可以在同样的流动相中良好分离尿嘧啶和烷基苯同时在体积排阻色谱中也证明分离有效。高达73000的每米柱效对于尿嘧啶是确定了的。相比之下，这些孔隙的存在对蛋白质的分离却有着不利的影响。 关键词 聚合物 超交联化 孔隙 整体柱 前言 整体柱色谱固定相在上世纪九十年代的介绍标志着在色谱柱技术的一大进步。现行的液相色谱整体柱可以被分为两个主要种类，如由二氧化硅制成的和由有机聚合物制成的两种。经典的基于二氧化硅的整体柱随着C18化学的发展而较好适合小分子的快速分离，但对于大分子却效果不佳。相反，多孔的聚合物整体柱由于缺少中孔表面积较小，使得它们分离大分子时非常理想。由于缺少小孔，一些毛细管整体柱分离小分子柱效并不太高。许许多多的方法之后用以尝试提高基于聚合物的整体柱分离小分子的效果，但事实证明总是难以制备既有大孔又有丰富多样的小孔的聚合物整体柱。 超交联化，是由Davankov 提出，使得由预成型的聚合物前体制备大比表面积材料得以实现。原始的方法是用线形聚苯乙烯，用Friedel-Crafts 烷基化反应来制得包括许多小孔的材料。本文首次证明使用原位超交联化制备大比表面积的多孔聚合物整体柱在毛细管色谱柱中的使用可快速并有效分离小分子，在快速体积排阻色谱中亦然。 实验部分 准备毛细管整体柱 标准的整块材料在毛细管中用混合物原位聚合反应而得，这个混合物包括12%（质量分数，下同）的苯乙烯、12%的氯甲基苯乙烯、16%的二乙烯苯、和用做致孔剂的18%的甲苯与42%的十二醇，以及用作引发剂的与单体重量比为1%的偶氮二异丁腈。用氮气换气后，混合物被用来填充毛细管。毛细管两端封闭，毛细管放于恒温水浴。接下来在70°C在聚合反应20h，切去毛细管两端，用乙腈清洗整体柱。 超交联化 整体柱用流速为0.25μL/min的二氯乙烷来冲洗2h。之后用1gFeCl3在20ml二氯乙烷的滤液以0.25μL/min的流速用泵流经柱子，再把柱子放于冰浴2h。超交联化反应在80°C的水浴中进行24h，之后就用水来清洗柱子。 结果与讨论 超交联整块材料的制备与表征 经典的多孔整块材料结构包括互相连接的微球，这是由于在单体与致孔剂混合物的聚会反应过程中物相的分离。一些单体如苯乙烯、氯甲基苯乙烯、二乙烯苯极差的反应速率导致聚合物中微球可以发生超交联化。当孔隙被热力学稳定的溶剂如二氯乙烷填满时，表层聚合物溶剂化。而一旦溶剂化，包含着氯甲基基团的表层就可以交联发生Friedel-Crafts 烷基化。这个过程中，聚合物链条固定在它们的溶剂化形态，因此形成了甚至可以在溶剂移除后仍然保留的小孔，导致在整块材料中表面积的显著增大。 总之超交联化的程度取决于二乙烯苯在单体中的比例，以及可参与反应的氯甲基苯乙烯和惰性苯乙烯的比率，这控制了相邻氯甲基位点的距离、超交联化的程度以及孔的大小。采用同等百分比的氯甲基苯乙烯和苯乙烯的单体混合物结果得到前驱整块材料表面积只有29m2/g（这是用氮气在干燥状态下吸附解离比来计算的），而交联化后整块材料中既有大孔也有中孔，表面积增加超过一个数量级达到663m2/g。这个值几乎是用于分离小分子的基于二氧化硅的整块材料的2倍。 表面积是中孔存在的良好表征。表面积另外一个量度是用总的孔隙率εT来表示。这可以很容易在流动相溶剂化的柱子里用色谱学方法计算： εT=100VM/VC 式中VM是尿嘧啶在80%的乙腈水溶液中洗脱的体积，VC是同样长度的空毛细管的体积。经额外柱体积校正后，我们发现εT的值对于前驱整块材料和超交联化后的整块材料分别为61%、59%。可以发现，超交联化并不会导致孔隙率任何显著改变，这是因为反应不会在原聚合物上增加任何显著质量，也就不会减少孔的体积。用色谱学方法计算的总的孔隙体积与单体混合物中致孔剂的比例相似，在本文情况下，是63%。 2、对小分子的同等分离 用尿嘧啶的实验也可以计算每米柱效得73000，这是在对应于van Deemter曲线最小值的0.3mm/s的流速下获得的。从Figure 1可以看出固相整块材料的超交联化对于分离效果的改善。 前驱整块材料对于所有烷基苯都无法有效分离，对比之下，超交联化后，每个峰都分开了，效果明显。 3、蛋白质的梯度洗脱 从很早开始