几乎所有的生物都能合成自身所需.pptVIP

T4 DNA ligase 一条多肽链(Mr=68000)，还可作用于 RNA,但效率低得多,需ATP作辅因子。 * E.coli DNA ligase Mr=74000, 作用于5‘端带磷酸基团的DNA底物 NAD+可促进该催化反应 分子克隆使用不多，亦不能连接RNA。 用途: cDNA第二链合成。 * T4 RNA ligase 由噬菌体编码 催化单链DNA或RNA连接。 主要用途是对RNA进行3＇末端标记 * Ligation of DNA fragments in vivo and in vitro in vivo：不仅形成重组分子的效率低,而且还可能伴随着末端核苷酸的缺失。 in vitro： 减小了DNA进入细胞后遭受降解危险； 粘性末端体外连接将保护原来识别序列的完整 可以控制连接时的反应条件 * affecting factors T：多数内切酶产生的粘性末端的Tm值在15℃以下,然而保持连接酶活性的最适温度却是37℃, 因此最适温度是粘性末端的Tm值和连接酶最适温度的折衷。经常采用12.5℃（4-15℃）。 DNA concentrations：外源片段浓度比载体DNA浓度高10-20倍 防止环化：碱性磷酸酶预先处理质粒载体 time：O/N better * polymerase 催化核酸体外合成反应 * DN