化脓灸结合中药治疗免疫性慢性肝损伤小鼠的实验研究.docVIP

　　化脓灸结合中药治疗免疫性慢性肝损伤小鼠的实验研究 【摘要】 　　目的通过化脓灸结合中药 治疗 免疫性慢性肝损伤小鼠的实验研究，为进一步探讨机理、提高疗效，探索治疗乙肝的新途径提供实验依据。方法通过制备免疫性慢性肝损伤小鼠模型，选择小鼠血清丙二醛（ＭＤＡ）含量、谷胱甘肽过氧化物醇（ＧＳＨ －ＰＸ）活力，肝匀浆超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）及病理形态学检查为实验指标，探讨化脓灸结合中药对免疫性慢性肝损伤小鼠的影响。结果化脓灸结合中药组与模型组相比，小鼠血清ＭＤＡ 含量下降，ＳＯＤ 活力上升，ＧＳＨ －ＰＸ 活力上升，并能将某些指标恢复至正常水平。结论化脓灸结合中药对免疫性肝损伤小鼠具有一定的治疗作用，值得进一步研究。 【关键词】 化脓灸 中药 肝损伤 　　本实验采用化脓灸结合中药防治由异种动物肝提取物作为抗原免疫纯系小鼠产生抗肝抗体发生慢性实验性肝损伤，并设立正常组、中药组、化脓灸组为对照，探讨化脓灸结合中药对免疫性慢性肝损伤小鼠的防治作用，为化脓灸抗乙肝病毒免疫药理的研究提供了一个新的视角，为深化化脓灸调节免疫的机理研究提供一定的理论依据。 　　 1 材料 　　1.1 药品与试剂 　　1.1.1 弗氏完全佐剂液体石蜡５．５ ｍｌ，无水羊毛脂１．５ ｍｌ，１００ｍｇ／ｍｌ 的卡介苗０．３７５ ｍｌ 研磨成乳剂。 　　1.1.2 肝提取物以ＳＤ 大鼠断头处死，用生理盐水从门静脉冲洗肝脏以祛除肝内存血，取肝脏剪成小块，再以生理盐水浸洗直至无色，取湿重１０ ｇ 肝组织，加１００ ｍｌ 生理盐水，用匀浆器制成１０％肝匀浆，再用高速冷冻离心机低温离心３０ ｍｉｎ（０ ～４℃），取上清液加等量的弗氏完全佐剂制成乳化液。 　　1.1.3 中药田基黄、虎杖等组成，按比例将生药加水浸泡１２ ｈ，煎煮、过滤，使水提物浓度每毫升相当于原药材１ ｇ。 　　1.1.4 试剂盒ＳＯＤ 测定试剂盒、ＧＳＨ －ＰＸ 测定试剂盒、丙二醛（ＭＤＡ）测定试剂盒均由上海伊华临床科技公司提供。 　　1.2 仪器７５２ 型光栅分光光度计（上海第三分析仪器厂） ＣＩ －２０Ａ，高速冷冻离心机，全自动生化分析仪（意大利产ＡＲ －Ｃ０Ｉ型）。 　　 　　1.3 动物 　　1.3.1 ＩＣＲ 新生小鼠雌雄各半，体重（６ ±１）ｇ，江西中医药高等专 科学 校医学实验动物中心提供。 　　1.3.2 动物分组小鼠随机分为6组，每组２０ 只，雌雄各半。Ａ—正常组；Ｂ—免疫性慢性肝损害组；Ｃ—免疫性慢性肝损害＋化脓灸组；Ｄ—免疫性慢性肝损害＋中药组；Ｅ—免疫性慢性肝损害＋化脓灸﹢药物组；Ｆ—免疫性慢性肝损害＋左旋咪唑阳性对照组。 　　1.3.3 免疫性慢性肝损伤小鼠模型的建立于实验的第３ 天，在小鼠背部皮下注射进行免疫，每鼠每次皮下注射乳化液０．１ ｍｌ，２次／周，共５ 周，第６ 周改为每周１ 次，共４ 次，前后共１４ 次。 　　 2 方法 　　Ａ，Ｂ 组给予生理盐水０．５ ｍｌ／ｄ 灌胃。Ｃ 组小鼠参照《 中国 兽医针灸学》选取足三里、肝俞、胆俞、阳陵泉、脾俞，用小艾炷直接灸７ ～９ 壮，灸后贴穴玉红膏，更换１ 次／ｄ，直至灸痂脱落。Ｄ组给予中药０．５ ｍｌ／ｄ 灌胃。Ｅ 组小鼠化脓灸治疗同Ｃ 组，辅与中药灌胃。各组连续给药时间同Ｃ 组动物治疗结束。上述５ 组动物于末次给药后１２ ｈ，自小鼠眼球采血，分离血清，取血清测定谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＳＨ －ＰＸ）活力、超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）及脂质过氧化物（ＭＤＡ）含量，按试剂盒操作程序测定。 　　 3 结果 　　3.1 化脓灸对血清ＧＳＨ －ＰＸ 含量变化的影响结果见表１。 　　表1 化脓灸对血清CSH-PX含量变化的影响（略） 　　与Ａ 组比较，★P＜０．０５；与其他各组比较，●P＜０．０５；与Ａ 组比较，■P＞０．０５；n＝２０ 　　结果显示模型组小鼠的血清ＧＳＨ －ＰＸ 含量明显低于正常对照组（P＜０．０５），提示造模成功；各实验组血清ＧＳＨ －ＰＸ 含量明显高于模型组（P＜０．０５），且Ｅ 组血清ＧＳＨ －ＰＸ 含量比其他各实验组升高明显，上升程度呈明显的量效关系。Ｅ 组与Ａ 组血清ＧＳＨ －ＰＸ 含量差别无显著性（P＞０．０５），提示化脓灸结合中药组能将模型组小鼠的血清ＧＳＨ －ＰＸ 含量恢复至正常水平。 　　3.2 化脓灸对血清ＳＯＤ 含量变化的影响结果见表２。 　　表2 化脓灸对血清SOD含量变化的影响（略） 　　与Ａ 组比较，★P＜０．０５；与其他各组比较，●P＜０．０５；与Ａ 组比较，■P＜０．０５；n ＝２０ 　　结果显示模型组小鼠的血清ＳＯＤ 含量明显低于正常对照组（P＜０．０５） ，提示造模成功；各实验组血清ＳＯＤ 含量明显高于模型组（P＜０．０５），同时Ｅ 组血清ＧＳＨ －ＰＸ 含量比其他