2015—2016学年人教版选修一月季的花药培养课件（22张）.ppt

一、被子植物花粉粒的形成 花丝 花药：囊状结构，内有很多花粉粒 1、雄蕊的结构 雄蕊： 药隔： 花药 花粉囊（4或2） 囊壁 花粉粒 表皮 纤维层 2、花药的结构 花粉是小孢子母细胞经过减数分裂而形成的，因此，花粉是单倍体的生殖细胞 3、被子植物的花粉发育 ②花粉粒的形成 花粉母细胞 （小孢子母细胞） 减数分裂 ①经历时期： 四分体时期、单核期、双核期 四分体时期 有丝 分裂 单核靠边期(小孢子) 单核居中期(小孢子) 小孢子 （单核花粉粒） 精子 精子 有丝 分裂 花粉管细胞核 生殖细胞核 生殖细胞 营养细胞 双核期 两个精子和一个营养核的基因型相同 1花粉母细胞 4个小孢子 减数分裂 有丝分裂 4个花粉管细胞核 4个生殖细胞核 有丝分裂 8个精子 二、产生花粉植株的两条途径 花粉 花粉 胚状体 愈伤组织 从芽 从芽 生根 移栽 脱分化 分化 再分化 诱导 不同植物的诱导成功率很不相同。 ①选择植物的种类 三、影响花药培养的因素 1、材料的选择 ②花药培养时间 就同一种植物来说，亲本的生理状况对诱导成功率也有直接影响。花期早时期的花药比后期的更容易产生花粉植物。 一般月季的花药培养时间选在五月初到五月的中旬，即月季的初花期。初花期的花蕾营养状态及生理状态会比较好，能提高花粉的诱导成功率。 一般来说，在单核期，细胞核由中央移向细胞一侧的时期，花药培养的成功率最高。即：最适合花药培养的小孢子发育时期为单核靠边期。 选择合适的花粉发育时期 并不是任何时期的花粉都可以经过培养产生愈伤组织或胚状体，花粉发育的过程中，只有某一个时期对离体刺激敏感。 为了挑选到单核期的花药，通常选择完全未开放的花蕾（完全未开放的花蕾，可挑选到单核期的花药，菌少、易消毒）。盛开的或略微开放的花，都不宜选作实验材料。 单核期以前的花药，质地幼嫩，极易破碎； 单核期之后的花药，花瓣已有些松动，给材料的消毒带来困难，且难以挑选到单核期的花药。 其它时期选择的缺点： 2、培养基： 花药培养所采用的培养基因植物的不同而有所变化：小麦中为N6，马铃薯、月季中为MS，油菜中为B5培养基。 3、其他因素 亲本植株的生长条件、材料的低温预处理以及接种的密度等对诱导成功都有一定的影响。 四、实验操作 （一）材料的选取 ②某些植物的花粉细胞核不易着色，需采用焙花青-铬矾法，这种方法能将花粉细胞核染成蓝黑色。 ①最常用的方法有醋酸洋红法 1、方法 ①醋酸洋红法染色机理 醋酸洋红为碱性染色剂，而花粉细胞内有染色体，染色体主要成分是DNA和蛋白质,易被碱性染料着色染成红色 。 将体积分数45％的醋酸100ml煮沸，缓缓加入1g洋红，在加热回流8h，冷却至50℃，过滤即可。 ②醋酸洋红的配置 2、醋酸洋红法 将花药放在载玻片上，加一滴1％的醋酸洋红，用镊柄将花药捣碎，盖上盖玻片在显微镜下检查。 ③染色操作 3、焙花青—铬钒法 将无水酒精与冰醋酸按体积比为3：1的比例混匀 ①卡诺氏固定液的配制方法 花药应该在卡诺氏固定液中固定20min，然后取出放在载玻片上，加焙花青—铬钒溶液染色，盖上盖玻片后在显微镜下检查。 将5g铬明矾[K2SO4Cr2(SO4)·24H2O]加入90ml蒸馏水中，溶解后加入0.1g焙花青，混匀并加热至沸腾，煮沸5分钟后冷却至室温，过滤，加蒸馏水定容至100ml。 ②焙花青—铬钒溶液的配制方法 ③染色操作 （二）材料的消毒 1、酒精处理 ①花蕾用体积分数为70%的酒精浸泡30秒，立即取出。 ②无菌水清洗 ③无菌吸水纸吸干花蕾表面的水分 2、消毒液处理 ① 放入质量分数为0.1%的氯化汞溶液中2~4分钟（也可质量分数为1%的次氯酸钙溶液或饱和漂白粉溶液） ② 无菌水冲洗3~5次 用于培养花药，实际上多数未熟，由于它的外面有花萼、花瓣或颖片保护，通常处于无菌状态，所以只要将整个花蕾或幼穗消毒即可。 在无菌条件下除去萼片和花瓣用镊子取出花药 ②要彻底去除花丝，因为与花丝相连的花药不利于愈伤组织或胚状体的形成 立即将花药接种于培养基上，通常每瓶接种花药7-10个。 1、剥取花药 ①勿损伤花药，以免诱导出非花粉愈伤组织 2、接种 （三）接种和培养 ①培养条件：温度控制在25℃左右，不需要光照。幼小植株形成后才需要光照。 3、培养 ②培养：一般经过20-30天培养后，会发现花药开裂，长出愈伤组织或释放出胚状体长出愈伤组织，则将愈伤组织及时转移到分化培养基上，以便进一步分化出再生植株。 ③注意：如果花药开裂释放出胚状体，则一个花药内就会产生大量幼小植株，必须在花药开裂后