基因芯片对生物学研究进展.pptVIP

进一步阐明基因的相互协同、抑制、互为因果等关系。有助于理解基因及其编码的蛋白质的生物学功能，并从已知生物学功能的基因推论未报道基因的生物学意义。同时，还可在基因水平上解释疾病的发病机理，为疾病诊断、药效跟踪、用药选择等提供有效手段。 急性白血病、黑色素瘤、卵巢癌、乳腺癌、前列腺癌、肝癌等表达谱芯片的研究。 * 基因芯片的优点： 高通量 大规模 高度平行性 快速高效 高灵敏度 高度自动化 * 组织芯片 不同的癌组织芯片； 病理组织切片； 不同器官来源组织芯片； * 蛋白质芯片, 又称蛋白质阵列或蛋白质微阵列，是指以蛋白质分子作为配基,将其有序地固定在固相载体的表面形成微阵列；用标记了荧光的蛋白质或其他它分子与之作用，洗去未结合的成分，经荧光扫描等检测方式测定芯片上各点的荧光强度，来分析蛋白之间或蛋白与其它分子之间的相互作用关系。 蛋白芯片(protein chip) * 研究蛋白质芯片的意义 蛋白质是基因表达的最终产物，接近生命活动的物质层面； 探针蛋白特异性高、亲和力强，可简化样品前处理，甚至可直接利用生物材料(血样、尿样、细胞及组织等)进行检测； 适合高通量筛选与靶蛋白作用的化合物； 有助于了解药物或毒物与其效应相关蛋白质的相互作用。 * 蛋白质检测芯片 蛋白质功能芯片 蛋白质芯片的分类 * 蛋白质芯片的制备 固相载体及其处理 载体（滴定板、滤膜、凝胶、载玻片） 蛋白质的预处理 选择具有较高纯度和完好生物活性的蛋白进行溶解 点制微阵列 可使用点制基因微阵列的商品化点样仪或喷墨法等 固定微阵列上的蛋白样点 膜为载体：芯片放入湿盒， 37°C 1h 载玻片为载体：化学修饰产生醛基固定蛋白 微阵列的封闭主要封闭试剂：BSA或Gly * 蛋白质芯片检测 探针标记检测法 无探针标记检测法 表面增强激光解吸离子化技术 (Surface enhanced laser desorption/ionization, SELDI) 表面等离子体共振检测技术（surface plasmon resonance, SPR） 原子力显微镜检测技术 （atomic force microscope, AFM ） 同位素标记检测 荧光标记检测 化学发光检测 酶免疫标记检测 胶体金标记检测 * 蛋白质芯片的应用 疾病诊断和预警 药物开发 蛋白质组学 * 定量检测组织提取液中的肿瘤标记物 孵育后的微阵列荧光图 A 含抗原 B 无抗原 微阵列方法与ELISA方法检出结果比较 疾病诊断 uPA 尿激酶型纤溶酶原激活因子 PAI-1血浆纤溶酶原激活因子抑制因子 VEGF 血管内皮生长因子 * 高通量筛选蛋白-蛋白作用抑制剂 药物开发 A 1500 个点阵的微阵列 B 局部点阵放大图及SPR信号 His6-RB/GST-E7相互作用抑制剂筛选微阵列图 加入His6-RB 加入含 PepC抑制剂的His6-RB * （1）疾病的蛋白质组研究 通过比较正常与病理条件下细胞或组织中蛋白质在表达量上的差异，可以发现与病理改变有关的蛋白质和疾病特异性蛋白。作为疾病诊断的生物标志物，认识发病机制，为早期诊断治疗和预防提供线索，对疾病进程进行监测与控制。 对肿瘤特异性生物标志物的检测； 在糖尿病及心血管疾病方面的应用； 对类风湿性关节炎生物标志分子的检测； 对人类细胞因子和趋化因子的测定和定量分析。 蛋白质芯片在蛋白质组学中的应用 * （2）病原微生物的蛋白质组研究 病原微生物蛋白质组研究对于阐明感染性疾病的发病机制，实现有效的预防，早期诊断和治疗，制备新的药物等方面有着重要意义。 （3）在药物开发中的应用 在病理状态下表达异常或特异性表达的蛋白质，以及细胞信号传递通路中的关键性蛋白质，都可能成为药物设计的靶分子。 （4）毒理学分析 通过发生损伤的组织器官与正常组织器官之间的蛋白质组比较，有助于阐明药物毒副作用的发生机制。 蛋白质芯片在蛋白质组学中的应用 * 人动脉平滑肌细胞蛋白谱 蛋白质组学 揭示了oxidized low density lipoprotein诱导人动脉平滑肌细胞的作用模式 细胞经oxidized low density lipoprotein作用后的蛋白谱 检出298个蛋白 54个蛋白表达量发生变化 4.7% 抗原（一组细胞-细胞间相互作用分子）表达上调； 13.4%抗原（结构蛋白，体液响应蛋白）表达下降 * 存在的问题 成本过高，需一系列昂贵的尖端仪器 芯片的标准化问题 提高芯片的特异性、简化样品制备和标记操作程序、增加信号检测的灵敏度和消除芯片背景对于结果分析的影响等等 * 染色质免疫沉淀芯片（Chip-Chip） C