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实验二：MS培养基的配制与灭菌 1、 实验目的:学习培养基的配制与灭菌操作方法. 2、 实验内容：培养基的配制,培养基的灭菌. 3、 实验仪器：主要为台秤,高压灭菌锅,各种玻璃器皿和容器等。 * 4、 实验操作方法： 量取大量元素 量取微量元素 量取钙盐、铁盐和其它有机物 称取蔗糖和琼脂 配制MS培养基 调PH值 分装培养基 培养基灭菌. * 5、 作业： 1）高压蒸汽灭菌注意事项有哪些？ 2）列表计算配制300ml下列培养基（pH＝5.8）所需的各种母液及其它成分用量。 A MS基本培养基附加琼脂10g/L B MS基本培养基附加IAA1mg/L、BA2mg/L、琼脂10g/L、蔗糖30g/L * 实验三：无菌操作技术 1、实验目的：掌握细胞工程中的无菌操作技术。学习植物外植体的消毒技术、离体培养的无菌操作技术。 2、实验内容：以柑桔种子为例，完成从外植体表面消毒到接种整个过程的操作。每人均独立操作完成。 3、实验仪器：主要为超净工作台等。 * 4、实验操作方法： 外植体选择 表面消毒 接种（无菌操作） 培养室培养 观察。 5、作业： 在无菌操作过程中，造成污染的原因有哪些？ * 植物细胞工程的基本设备和无菌操作 福建农林大学生命科学学院 张 健 * 一、基本设备 1、植物细胞工程实验室的组成 洗涤室 灭菌室 配制室 无菌操作室 培养室 鉴定室 驯化移植室 * 2、基本设备 玻璃器皿和器械 无菌操作设备 培养设备 其它设备 * * * * * * * * 二、无菌操作 1、各种灭菌方法及其适用范围 A 干热灭菌法 B 湿热灭菌法 C 熏蒸灭菌法 D 过滤灭菌法 E 药剂灭菌法 F 灼烧灭菌法 G 照射灭菌法 * 2、无菌操作过程 A 清洗 玻璃器皿的清洗 实验材料的清洗 B 灭菌 ※ 培养材料的灭菌 以药剂灭菌法为主 主要考虑：药剂的灭菌效果、材料对药剂的耐受力 * * * ※ 培养基灭菌 高压蒸汽灭菌 过滤灭菌 C 接种 经过表面灭菌的材料，按不同的要求，经过剪切、整理后，移植到培养基上培养的过程。 接种室（无菌操作室）的灭菌 接种台的灭菌 工作人员注意事项 * 三、培养基的组成及母液的配制 1、培养基的组成 无机营养： 大量元素：N、P、K、S、Ca、Mg 微量元素：Fe、Mn、Cu等 有机营养： 碳源：蔗糖、葡萄糖、果糖 氮源：氨基酸类、酰胺类 活性物质：烟酸、肌醇、生物素等 植物激素： 生长素类：IAA、NAA、IBA等 细胞分裂素类：激动素、玉米素等 其它类：赤霉素、脱落酸、乙烯 附加物类： 琼脂、椰乳、水解蛋白等 * 2、培养基母液配制 配制培养基前，为了使用方便和用量准确，常将大量元素、微量元素、铁盐、有机物类和激素类分别配制成比培养基浓度大若干倍的母液。当配制培养基时，只需按预先计算好的量吸取母液稀释即可。 母液应保存在冰箱中备用，保存时间不可过长，当母液出现沉淀或霉菌团时，则不能使用。 * 实验一 培养基母液的配制 1、实验目的：掌握培养基母液的配制方法。 2、实验内容：（1）培养基母液配制的各种准备工作；（2）以常用基本培养基MS母液的配制以及各种附加成分母液的配制为例，学习培养基母液的配制方法. 3、实验仪器：主要包括电子天平、烘干箱、蒸馏水器、冰箱、各类常用玻璃器皿和容器等。 * 4、实验操作方法： 玻璃器皿的清洗与干燥 药品用量计算 称取药品 大量元素母液的配制 微量元素母液的配制 钙盐和铁盐母液的配制 激素及其它有机物母液的配制. * 5、作业： 1）按MS培养基配方需要量计算配制100ml母液所需药品量、母液浓度及配制500ml培养基各种母液吸取量 2）为什么在配制培养基之前要先配制母液？ *