大豆异黄酮苷元检测方法的研究.docVIP

　　大豆异黄酮苷元检测方法的研究 作者：张磊,金桂芳,杨红,习志刚 【摘要】 目的 建立大豆异黄酮苷元含量测定 方法 。方法 采用HPLC法，Diamonsil C18柱 (250 mm×4.6 mm,5 μm)，流动相：甲醇-0.3%磷酸溶液（体积比48∶52），流速0.7 mL/min，测定波长260 nm,柱温25 ℃。结果 制备的大豆异黄酮苷元总含量为70.98%;大豆苷元、黄豆黄素和染料木素平均回收率分别为98.7%、98.9%和99.2%，RSD分别为2.1%、1.6%和1.4%。结论 所建立的测定方法重现性好、可靠，可用于3种大豆异黄酮苷元的含量测定。 【关键词】 大豆异黄酮苷元；高效液相色谱法；含量测定 　　Abstract:Objective To establish an HPLC method for the content determination of isoflavone aglycones. Methods Isoflavone aglycones onsil C18 column (250 mm×4.6 mm，5 μm). A mixture of MeOH-0.3%H3PO4（48∶52) obile phase L/min. The detecting at 25 ℃.Results The content of isoflavone aglycones in the sample ethod can be used for the quality control of soy isoflavone aglycones. 　　Key L）体积分数为70％的乙醇溶液浸泡30 min，80 ℃水浴回流提取2次，每次90 min；合并提取液，过滤后回收乙醇、浓缩；上AB-8大孔树脂,以体积分数为50％的乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，浓缩，45 ℃烘干。适量乙醇溶液溶解，拌样上聚酰胺柱，以体积分数为70％的乙醇溶液洗脱，得粗提浸膏，45 ℃烘干。取一定量的粗提物置于圆底烧瓶中，加入4倍量（g/mL）的7%盐酸-乙醇液，80 ℃水浴水解2 h，浓缩，乙醚萃取，挥干乙醚；用适量体积分数为70％的乙醇溶液溶解，石油醚脱脂，用200～300目硅胶拌匀， 自然 干燥，上硅胶柱，用三氯甲烷-甲醇（体积比6∶1）洗脱，收集洗脱液，挥去溶剂，得大豆异黄酮苷元混合物［3,4］。 　　2.2 样品溶液的制备 　　精密称取大豆异黄酮苷元混合物28.50 mg，置50 mL量瓶中，加甲醇超声溶解，定容，精密吸取1.0 mL置10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，得质量浓度为0.0570 mg/mL的样品溶液。 　　2.3 对照品溶液的制备 　　分别精密称定大豆苷元、染料木素对照品13.20 mg、14.60 mg各置50 mL量瓶中，加甲醇超声溶解，定容，得浓度为0.264 0 mg/mL的大豆苷元及0.292 0 mg/mL的染料木素对照品溶液；精密称定黄豆黄素27.75 mg，置50 mL量瓶中，加甲醇超声溶解，定容，精密吸取1.0 mL，至5 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，得0.111 0 mg/mL的黄豆黄素对照品溶液。4 ℃储存备用。 　　2.4 色谱条件［5～6］ Diamonsil C18柱 (250 mm×4.6 mm，5 μm)；柱温25 ℃；流动相：甲醇-0.3%磷酸溶液（体积比48∶52）；流速=0.7 mL/min ；测定波长260 nm；进样量：20 μL。 　　2.5 线性关系 分别精密吸取上述大豆苷元、染料木素、黄豆黄素对照品溶液0. 8、1.5、0.6 mL置100 mL量瓶中，甲醇定容，得混合对照品溶液Ⅰ。同法制备混合对照品溶液Ⅱ-Ⅵ，浓度见表1，混合对照品HPLC色谱图见图1。 　　表1 混合对照品溶液中大豆苷元、黄豆黄素、染料木素的质量浓度 （略） 　　Tab.1 Contents of genistein,daidzein and glycitein in the control sampleρ/ 　　按上述色谱条件依法测定，分别以大豆苷元、黄豆黄素和染料木素的浓度(μg/mL)对峰面积作回归 计算 ,得回归方程（n＝6）分别为： y=5836.1x+0.8812，r=0.9994； y=1177.4x+0.1372，r=0.9994； y=3256.6x+0.894，r=0.9992。 大豆苷元、黄豆黄素和染料木素分别在2.112～21.12 μg/ mL，0.666 0～6.66 0 μg/mL,4.380～43.80 μg/mL范围内，线性关系良好。 　　1.大豆苷元 2.黄豆黄素 3.染料木素 　　图1 对照品HPLC色谱图（略） 　　Fig.