大豆苷元对异丙肾上腺素所致大鼠心肌肥厚的保护与NO的关系研究.docVIP

　　大豆苷元对异丙肾上腺素所致大鼠心肌肥厚的保护与NO的关系研究 作者：钟星明， 于江云， 王静， 占敏艳， 熊丽娇， 陈喜贵， 余星梅， 曾靖 【摘要】 目的观察大豆苷元（DD）对异丙肾上腺素（Iso）所致大鼠心肌肥厚的保护作用及其与一氧化氮（NO）的关系。方法采用Iso l mg/（kg·d），背部皮下注射，连续10 d，建立大鼠心肌肥厚模型。造模第2天开始给大鼠皮下注射不同浓度的大豆苷元或NS及溶剂，连续14 d，末次给药后禁食12 h，称重，麻醉后断头取血，取心脏称重后 计算 全心重量指数及左心重量参数；采用试剂盒测定血清一氧化氮合酶（NOS）、内皮型NOS（eNOS）、诱导型NOS（iNOS）活性及NO含量。结果与正常对照组比较，Iso模型组血清NO含量下降，eNOS活性明显下降，iNOS活性显著升高；与ISO模型组相比，大豆苷元 治疗 组血清NO含量和eNOS活性显著升高，iNOS活性下降。结论大豆苷元对异丙肾上腺素所致大鼠心肌肥厚具有保护作用，其作用机制与提高NO含量和eNOS活性、降低iNOS活性有关。 【关键词】 大豆苷元； 异丙肾上腺素； 心肌肥厚； 保护 大豆苷元(Daidzin,DD)系葛根中的主要成分之一，葛根的有效成分为大豆苷元、染料木苷、黄豆黄苷、染料木素、黄豆黄素。研究发现大豆苷元具有抗心律失常、局部麻醉、影响心房肌电生理特性、心肌缺血再灌注损伤的保护、Ca2+拮抗、耐缺氧及抗氧化等作用［1～8］。心肌肥厚是以心肌细胞体积增大和蛋白含量增多为主要特征的代偿反应，是对各种心血管刺激因子的适应反应，但持续的心肌肥厚会导致死亡。研究表明，连续用异丙肾上腺素（Iso）刺激可诱导大鼠心肌肥厚［9］，本实验利用Iso背部皮下注射构造大鼠心肌肥厚模型，研究大豆苷元对心肌肥厚的保护作用及其与一氧化氮（NO）及一氧化氮合酶（NOS）的关系。 　 　1 材料与仪器 　　1.1 药品和试剂大豆苷元由沈阳药科大学植化教研室提供，纯度为98 %；实验前用二甲基亚砜（DMSO）溶解，使用时用双蒸水稀至所需浓度；盐酸异丙肾上腺素注射针剂（上海禾丰制药有限公司，批号：；NO和NOS分型检测试剂盒购自南京建成生物工程研究所。 　　1.2 仪器754N可见光分光光度计（上海精密 科学 仪器有限公司）；赛多利斯BS224S型 电子 天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司)。 　　1.3 动物SD大鼠购自江西中医学院实验动物中心，体质量220～250 g，雄性（动物中心许可证号：2005-0001，动物合格证号：JZDSO)和大豆苷元高剂量（0.3 μmol·kg-1）及低剂量（0.1 μmol·kg-1）治疗组；除正常对照组外各组分别背部皮下注射Iso 1 mg·kg-1，正常对照组同部位注射同体积NS，1次/d，连续10 d，建立心肌肥厚动物模型，对照组和心肌肥厚模型组给同体积的生理盐水腹腔注射，造模后第2天，各组于皮下注射同体积的NS、溶剂及不同浓度的大豆苷元，1次/d，连续14 d。 　　1.4.2 心脏重量指数和左心室重量指数的测定末次给药后禁食12 h，称重后麻醉，取出心脏，去除结缔组织，用生理盐水洗净，滤纸吸干后称全心重量，剪除心房和右心室，称左心室重量，计算心脏重量指数和左心室重量参数：心脏重量指数=全心重(mg)/体重(g), 左心室重量指数=左心室重(mg)／体质量(g)。 　　1.4.3 血清T-NOS、eNOS、iNOS活性和NO含量的测定大鼠麻醉后，断头取血，4℃，2 000 r/min，离心10 min，分离血清，-80℃保存。严格按试剂盒说明测定血清T-NOS、iNOS的活性和NO含量，计算eNOS活性=T-NOS活性-iNOS活性。 　　1.4.4 统计学分析实验数据采用Graphpad prism4.0软件进行单因素方差分析,结果以柱状图表示，Plt;0.05认为有统计学意义。 　 　2 结果 　　2.1 DD对心肌肥厚大鼠心脏重量指数和左心室重量指数的影响Iso模型组大鼠心脏重量指数及左心室重量指数值较正常对照组明显增加。0.1 μmol·kg-1 DD组与心肌肥厚模型组比较心脏重量指数有下降趋势，且有统计学差异（图1）。0.1 μmol/kg DD组与心肌肥厚模型组比较左心室重量指数下降，且有统计学差异（图2）。提示大豆苷元对异丙肾上腺素致大鼠心肌肥厚有保护作用。 　　2.2 DD对心肌肥厚大鼠血清NO含量的影响 与正常对照组比较，Iso模型组血清NO含量下降，且有统计学差异；与Iso模型组相比，低剂量及高剂量DD组血清NO含量均有显著提高（图3）。 　　2.3 DD对心肌肥厚大鼠血清eNOS及iNOS活性的影响与Iso模型组相比，DD低浓度及高浓度组T-N