《分析化学教学课件》平面色谱法-2012.pptVIP

平面色谱的分类及分离机理 纸色谱法（PC, paper chromatography）：属分配色谱 薄层色谱法(TLC, thin layer chromatography)：吸附薄层、分配薄层、离子交换薄层、凝胶薄层 薄层色谱法：经典薄层、高效薄层(HPTLC)、高压薄层(OPTLC) 薄层电泳法(thin layer electrophoresis, 了解)：主要用于生物大分子（蛋白质、核酸、多肽、糖类）等带电荷的物质。 第二节 平面色谱的主要技术参数 一、定性参数 二、相平衡参数 三、面效参数 四、分离参数 一、定性参数(quality parameters) 1. 比移值Rf (Retention factor) 续前 讨论 Rf与K有关，即与组分性质（溶解度）以及薄层板和展开剂的性质有关。 色谱条件一定，Rf只与组分性质有关，是薄层色谱基本定性参数，说明组分的色谱保留行为 续前 1）Rf范围：0 Rf 1 （组分迁移速度和距离小于展开剂迁移速度和距离） Rf = 0.2——0.8（常用） 0.3——0.5（最佳） 2) 影响Rf的因素:被分离物质的结构和性质,薄层板的性质,展开剂的性质,温度,展开剂蒸汽等 续前 2. 相对比移值Rs (了解) 讨论 参考物与被测组分在完全相同条件下展开 可以消除系统误差，大大提高重现性和可靠性； 参考物可以是后加入纯物质，也可是样品中已知组分 相对比移值Rs与组分、参考物性质及色谱条件有关，范围可以大于或小于1 二、相平衡参数 相平衡参数：分配系数K和容量因子k R’表示单位时间内一个分子在流动相中出现的几率，也可以表示组分分子在平面上移动的速度. Rf＝L/L0=ut/u0t，定时展开时R’＝ Rf 讨论 ⑴ Rf与K有关，即与组分性质（溶解度）以及薄层板 和展开剂的性质有关，K↑大，Rf↓小 ⑵薄层板一定，Rf只与组分性质有关，对于极性组分， 展开剂极性↑大，Rf↑大（容易洗脱） 展开剂极性↓小，Rf↓小 （不容易洗脱） ⑶Rf＝1 K或k=0 组分在前沿 Rf＝0 K或k=∞ 组分在原点 （三）面效参数 1、理论塔板数 n=16(L/W)2 L:原点到斑点中心的距离 W：组分斑点的纵向宽度 2、塔板高度 H=L0/n L0：原点到展开剂前沿的距离 n越大，H越小。 （四）分离参数 1、分离度(resolution; R) 两相邻斑点中心的距离与两斑点平均宽度的比值 L1 、L2 :分别为原点至两半斑点中心的距离， W1、W2斑点的宽度。 2.分离数(separation number SN，了解) 定义：相邻斑点分离度为1.177时，在Rf=0(原点)到Rf=1(溶剂前沿)之间能容纳的色谱斑点数。 一般薄层板的分离数为 7~10，高效薄层板可达10~20。SN是衡量分离容量的重要参数 第三节 平面色谱固定相与制备 一、平面色谱常用吸附剂(absorbent)： 多孔、微粒状物质,吸附能力与吸附中心的多少及氢键形成能力的大小有关 1. 硅胶 2. 氧化铝 3. 聚酰胺 1. 硅胶（SiO2·H2O, silica gel） 结构：内部——硅氧交联结构→多孔结构 表面——有硅醇基→氢键作用→吸附活性中心 特性： 1）与极性物质或不饱和化合物形成氢键 物质极性↑，吸附能力↑→强极性吸附中心，不易洗脱 吸附活性次序：活泼型束缚型游离型 2）吸水→失活 →105～110OC烘干30分钟(可逆失水)→吸附力最大 →500OC烘干(不可逆失水)→活性丧失，无吸附力 续前 2. 氧化铝 碱性氧化铝 pH 9～10 适于分析碱性、中性物质 中性氧化铝 pH＞7.5 适于分析酸性碱性和中性物质 酸性氧化铝 pH 4～5 适于分析酸性、中性物质 3. 聚酰胺 氢键作用 氢键能力↑强，组分比移值越小 二、吸附剂的选择原则 根据被测物极性和吸附剂的吸附能力 被测物极性强——弱极性吸附剂 被测物极性弱——强极性吸附剂 三、薄层板的制备(preparation of the plate) 定性分析——窄条 定量分析——10×20cm 第四节 样品制备与点样 一