乳酸检测试剂盒(乳酸脱氢酶微板法).pdfVIP

北京雷根生物技术有限公司 乳酸检测试剂盒(乳酸脱氢酶微板法) 简介： 乳酸(Lactic acid ，LD)又称2-羟基丙酸是一种化合物，是一种含有羟基的羧酸，分子 式是C H O ，参与生物化学很多反应过程。乳酸检测有化学氧化法、酶催化法、电化学法、 3 6 3 酶电极感应器法。其中，酶催化法是使用乳酸脱氢酶(LDH)催化乳酸氧化，生成丙酮酸和 NADH ，通过分光光度法或荧光光度法测定NADH 的生成量，进而计算出乳酸含量。 乳酸检测试剂盒(乳酸脱氢酶微板法)其检测原理是在 NAD 存在条件下，乳酸脱氢酶 (LDH)催化乳酸生成丙酮酸，同时生成NADH。在碱性条件下显色剂与丙酮酸生成复合物， 幵使平衡偏向乳酸氧化为丙酮酸的方向，驱动反应完成，生成的NADH 与乳酸为等量摩尔。 通过分光光度比色法(酶标仪)测定 340nm 处吸光度，据此通过比色分析就可以计算出 LD 水平。 组成： 编号 TC0731 Storage 名称 110T 试剂(A): 乳酸标准(20mmol/L) 1ml 4℃ 避光 试剂(B): 乳酸标准稀释液 1ml RT 试剂(C): C1: LD Assay buffer 5ml 4℃ 避光 LD 显色液 C2: NAD 2 支 -20℃ 避光 临用前，按C1:C2:C3=2.25ml:1 支:3μl 的比例混合，即为LD 显色液。 试剂(D): LD 终止液 30ml RT 使用说明书 1 份 操作步骤(仅供参考) ： 1、准备样品： ①血浆、血清、尿液及其他体液样品：血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于 本试剂盒的测定，尿液通常也可以直接用于测定，-20℃冻存。 ②细胞或组织样品：取恰当细胞或组织裂解液，如果有必要需进行适当匀浆，低速离 心取上清，-20℃冻存，用于LD 的检测。 ③高浓度样品：如果样品中含有较高浓度的 LD ，可以使用原有的裂解液或PBS 等进 行稀释，如鸡血清、血浆可稀释5 ～10 倍后检测。 2、配制标准品工作液：取乳酸标准(20mmol/L) 0.1ml 溶解于0.3ml 乳酸标准稀释液 ，使 浓度达到5mmol/L ，即为标准品工作液-乳酸标准(5mmol/L)。4℃避光保存2 个月有 效。 北京雷根生物技术有限公司 3、 4、LD 检测：按照下表设置空白孔、对照孔、标准孔、测定孔，溶液应按照顺序依次加入， 幵注意避免产生气泡。如果样品中的LD 含量过高，可以减少样品用量或适当稀释后再 进行测定。样品的检测最好能设置平行孔。 加入物 空白孔 对照孔 标准孔 测定孔 蒸馏水/μl 5 — — — 待测样品(血清、血浆、体液等)/μl — 5 — 5 乳酸标准(5mmol/L)/μl — — 5 — LD 显色液/μl 40 — 40 40