人类巨细胞病毒的限制性内切酶分析.pdfVIP

　浙江检验医学 2003 年第 1 卷第 1 期 　Zhejiang Journal of Laboratory Medicine Sciences , Vol . 1 , No . 1 , 2003 7 中图分类号 :R511 　　　　文献标识码 :A 人类巨细胞病毒的限制性内切酶分析 董关萍 , 尚世强 ,俞锡林 ,余钟声 ,邵祝洪(浙江大学医学院附属儿童医院 ,杭州 310003) ( ) ( ) 摘要 : 目的　评估聚合酶链反应 PCR 加限制酶分析在婴儿巨细胞病毒 CMV 感染中的应用 。方法 　在巨细胞病毒 DNA 多聚 酶基因中设计一对引物 ,对 CMV 进行 PCR 扩增并选择 BstUI 进行酶切以鉴别扩增产物 。怀疑 CMV 感染患儿的32 份血标本和 5 份脑脊液标本进行 PCR 和 ELISA 法检测 。结果 　巨细胞病毒 PCR 扩增后产物为 592 bp ,经BstUI 酶切后证实为 CMV DNA ,其 最小检出量为 01 fg ,与乙肝病毒 、真菌 、细菌和人类基因组无交叉反应 。用该方法检测临床 32 份血和 5 份脑脊液标本中的 CMV ,12 份血和 1 份脑脊液标本阳性 , 同时用 ELISA 法检测血标本 ,5 例阳性 。PCR 阳性检出率为 375 % , ELISA 为 157 % ( P 005 ) 。结论 　PCR 加限制酶分析具有特异敏感 ,快速准确的特点 ,能提高婴儿巨细胞病毒感染诊断的特异性和敏感性 。 关键词 :人类巨细胞病毒 ;聚合酶链反应 ;DNA 多聚酶基因 ( [ 1] 　　本研究在人巨细胞病毒 human cytomegalovirus , 抗凝血白细胞提取采用本实验室建立的方法 ,其 HCMV) 的DNA 多聚酶基因上自行设计一对引物 ,进 DNA 的提取同标准病毒株 。 行 PCR 扩增 ,找出BstUI 酶进行酶切 ,建立了 PCR 加 1. 2 . 2 　PCR 扩增 　在巨细胞病毒 DNA 多聚酶基因 限制酶分析方法 。通过检测临床 32 份婴儿和新生 内, 经 计 算 机 查 阅 设 计 一 对 引 物 。引 物 1 : 儿外周血和 5 份脑脊液标本的 HCMV DNA ,并与特 CGACTTTGCCA GCCTGTACC ; 引物 2 :A GTCCGTGTCC 异性 lgM 相对照 ,取得较好效果 。 ( CCGTA GATG 上海生工生物工程技术有限公司合 ) μ 1 　材料和方法 成 。PCR 扩增体系为 : 50 l 的反应体系中加 Taq 1. 1 　材料 酶 05 μ( ) μ l 25U ,10 ×PCR 缓冲液 5 l ,dNTP 混合液 1. 1. 1 　标准病毒株和菌株来源 　CMV (AD169 株) 4 μ( μ ) 5 μ( μ ) μ l 各 125 M ,MgCl2 l 25 M ,模板 5 l ,上下 由安徽医科大学微生物学教研组提供 ; 乙肝病毒 、大 游引物各 15 μ( )