人干扰素_1基因启动子荧光素酶报告基因质粒的构建及其转录活性分析.pdfVIP

· · 中国生物制品学杂志2014 年6 月第27 卷第6 期 Chin J Biologicals June 2014 ，Vol. 27 No. 6 752 ·基础研究 · 人干扰素 λ1基因启动子荧光素酶报告基因 质粒的构建及其转录活性分析 庞立丽，邵长胜，段招军 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所，北京102206 摘要：目的 构建人干扰素λ1 （interferon λ1，IFNλ1）基因启动子荧光素酶报告基因载体，并探讨仙台病毒及质粒 IRF3-5D 和HA-IRF7 对其转录活性的影响。方法 提取BEAS-2B 细胞基因组DNA，以其为模板，PCR 扩增IFNλ1 基 因启动子，插入荧光素酶报告基因载体pGL3-enhancer ，构建IFNλ1 基因启动子荧光素酶报告基因质粒IFNL1-luc ，将 其转染293T 细胞，同时用质粒IFNβ-luc 和pGL3-enhancer 转染作为对照。转染24 h 后感染仙台病毒，于感染前和感 染后4 、12、18 和24 h 收集细胞，进行双荧光素酶活性检测；用质粒IRF3-5D 或HA-IRF7 与质粒IFNL1-luc 共转染， 36 h 后收集细胞，进行双荧光素酶活性检测。结果 IFNλ1 基因启动子荧光素酶报告基因质粒IFNL1-luc 经双酶切 及测序鉴定，证明构建正确；分别转染质粒IFNL1-luc 和IFNβ-luc 的细胞感染仙台病毒后，荧光素酶活性倍数均随 时间延长呈明显上升趋势，至 18 h 达到峰值（分别为 1 000 倍和2 300 倍），转染质粒pGL3-enhancer 的细胞感染 仙台病毒后，不同时间点收集的细胞，荧光素酶活性倍数一直处于较低水平；质粒HA-IRF7 或IRF3-5D 对IFNL1-luc 的 活化倍数明显高于pGL3-enhancer （P 0. 05）。结论 成功构建了IFNλ1 基因启动子荧光素酶报告基因质粒IFNL1- luc，仙台病毒及质粒IRF3-5D 和HA-IRF7 均能激活IFNL1-luc 的转录，为进一步研究调控IFNλ1 表达的信号转导 通路奠定了基础。 关键词：干扰素λ1；启动子；双荧光素酶报告基因；仙台病毒；转录；活性 中图分类号：Q511 Q782 文献标识码：A 文章编号：1004-5503 （2014）06-0752-05 DOI:10.13200/ki.cjb.000394 Construction and transcriptional activity of recombinant plasmid containing human interferon λ1 gene promoter luciferase reporter gene PANG Li-li，SHAO Chang-sheng，DUAN Zhao-jun National Institute for Viral Disease Control and Prevention ，Chinese Center for Disease Control and Prevention ， Beijing 102206 ，China Corresponding author ：DUANZhao-jun ，E-mail ：zhaojund@126.com Abstract ：Objective To construct