基因工程第章复习题.doc

第4-6章复习题 一、真空题 1、用于PCR反应的耐热聚合酶有（ ）、（ ）、（ ）、（ ）、（ ）等。 2、基因工程实验中常用到一些有毒、致癌、致畸试剂，这些试剂有（ ）、（ ）、（ ）等。 3、根据杂交对象的不同，分子杂交可分为（ ）、（ ）、（ ）、（ ）。 4、用于电泳分离DNA或RNA的凝胶有（ ）、（ ）其中（ ）可区分1bp的DNA。 5、外源DNA导入宿主的方法有（ ）、（ ）、（ ）、（ ）等。 二、问答题 核酸电泳的基本原理是什么？主要有哪几种凝胶电泳？各有什么用途？ 2、什么叫Sanger测序法，简述手动Sanger测序的操作步骤。 3、什么是Southern hybirdization？简述其基本过程？ 4、什么是Northern hybirdization？ 5、什么是原位杂交？ 6、什么是Western hybirdization？ 7、什么是探针？如何标记探针？ 8、什么是transformation？ 9、什么是transduction？ 10、简述PCR的基本原理和反应过程？ 11、耐热DNA聚合酶的种类和活性？ 12、什么是PCR平台效应？ 13、什么是寡聚核苷酸芯片？简述其工作原理？ 14、试述基因克隆的基本步骤？ 15、什么是基因文库、cDNA文库？ 16、简述用BAC载体构建基因文库的操作步骤？ 17、什么是mRNA丰度 18、简述置换引导法合成cDNA第二链的原理？ 19、什么是DNA多态性？ 20、RFLP的基本原理？ 21、什么是SSR？ 22、AFLP的基本原理？ 23、什么是RAPD？ 24、有两个杂交亲本，其杂交后代为F1，请用所学分子标记的基本原理设计一个实验，鉴定F1代的纯度。 25、什么是差别杂交、什么是扣除杂交？ 26、什么是mRNA差异显示法？如何利用mRNA差异显示法筛选目标基因？ 27、什么是酵母双杂交体系？ 28、基因工程实验中会用到哪些高毒、致癌、致畸试剂？ 29、已知某一基因的所表达蛋白质的氨基酸序列，如何克隆到该基因？ 30、建立一个基因文库后，如何鉴定一个携带目的基因的克隆？ 31、T cell和B cell 来自于一种前体细胞，且都能识别特异性抗原，但T cell 只能说别表面抗原，其原因是T cell中含有一种由ter基因表达的TCR蛋白。你采用何种方法能克隆到ter基因？ 32、在野生的拟南芥中发现一种特抗炭疽病的植株，且抗病性是由单一基因控制的，试问采用何种方法能克隆到此抗炭疽病的基因？ 33、基因克隆是如何使含有单个基因的DNA片段得到纯化的？ 34、当两种限制性内切酶的作用条件不同时，若进行双酶切，应采取什么措施？为什么？ 35、已知某一细菌的一个ORF，但不知其是否有基因产物，试述采用什么方法可验证是否有其基因产物。 36、说明基因芯片的工作原理及其在生物学研究中的意义 43、已知水稻某特性由某一个单基因控制，试述用Ac-Ds转座子标签法克隆该基因的原因和方法。 44、禾毂类蛋白质的赖氨酸和色氨酸含量低，现拟用基因工程方式改变禾毂类蛋白质氨基酸不平衡的状态，试述其实验方案。 45、打算将一个cDNA克隆到一个表达载体，以便在E.coli中大量制备相应的蛋白质。这个cDNA的两侧具有BamHI的位点，因此计划将它从BamHI的位点插入载体中。实验严格地按照克隆手册中的方法进行：载体用BamHI切割后，立即用碱性磷酸酶处理，除去5’磷酸。接着将处理过的载体同用BamHI切割的cDNA片段混合，加入DNA连接酶后进行温育，连接以后，将DNA同已处理过的可以接受DNA的细菌感受态细胞混合。最后，将混合物涂布在加有抗生素固体培养基的平板上。由于载体上带有抗生素的抗性基因，所以转化的细菌能够存活。实验中同时设置了4个对照： 1： 将未同任何载体接触过的细菌细胞涂布在培养平板上； 对2： 将未切割载体转化过的细菌细胞涂布在培养平板上； 对3： (但未用碱性磷酸酶处理)并用连接酶连接(但没有cDNA片段)的载体转化过的细菌细胞涂布在培养平板上； 对照4： (并用碱性磷酸酶处理过)并用DNA连接酶连接(但没有cDNA片段)的载体转化过的细菌细胞涂布在培养平板上。 (表)。在第二次实验中，自己制备感受态细胞，但这一次，所有的平板上都没有菌落生长(表)。接着又进行了第三次实验，这次得到了转