头孢地嗪钠高分子聚合物分析方法的建立与方法学验证.docVIP

头孢地嗪钠高分子聚合物分析方法的建立与方法学验证 　　【摘要】目的:建立对头孢地嗪钠中高分子聚合物进行分离分析的质量控制方法, 并对其进行验证。方法:采用凝胶色谱法, 色谱柱为Sephadex G-10, 流动相A 为pH7.0的0.2mol/L磷酸盐缓冲液〔0.2mol/L磷酸氢二钠溶液-0.2mol/L磷酸二氢钠溶液 , 流动相B 为水; 流速为每分钟1.0ml; 检测波长为254nm, 进样量为200μl , 自身对照外标法定量。结果验证了该方法能够较好的分离头孢地嗪钠和高聚物, 可用于注射用头孢地嗪钠中高分子聚合物的检验。 　　【关键词】头孢地嗪钠;高分子聚合物;分析;验证 　　 　　抗生素是临床用量最大和较易发生不良反应的药物。其中最常见的一类不良反应就是过敏反应。多年来的研究已证明,在β-内酰胺类抗生素所致的速发型过敏反应中,药物分子本身只是半抗原,药物中存在的高分子聚合物才是引发速发型过敏反应的真正过敏原,因此严格控制抗生素中高分子聚合物的含量有着重要的意义。 　　头孢地嗪是德国赫斯特公司和法国罗塞尔公司共同开发的第三代注射用头孢菌素类抗生素,同时也是世界上第一个具有免疫增强功能的第三代头孢菌素,1990年首次在日本上市。与头孢三嗪、头孢氨噻肟等头孢菌素相似,在7位上具有一个含氨基噻唑结构(亚氨甲氧基氨噻唑)的侧链,这一结构使其不仅保持了对G+菌的抗菌活性,而且对G-菌也有效,并对β-内酰氨酶稳定。此外,在3位上的巯基噻唑结构,使头孢地嗪不易被酶降解,在动物和人体中的半衰期明显延长,由于此基团赋予化合物独特的性质,使得头孢地嗪在广谱抗菌的同时,还具有其他头孢类药物所不具备的免疫增强作用,因此具有广泛的临床应用前景。 　　关于高分子聚合物的测定方法,国内外已有许多报道,主要的方法是色谱法。其中,以葡聚糖凝胶Sephadex G-10为基础的凝胶色谱分析方法在中国药典2005年版头孢类聚合物检查方法中普遍采用。本文参照中国药典2005年版附录分子排阻色谱法的相关要求,对头孢地嗪钠聚合物的检查方法进行研究。 　　1.试验仪器及试验材料 　　1.1仪器 　　LC-10AT高效液相色谱仪;色谱柱:Sephadex G-10柱,柱内径1.5cm,柱高度40cm。 　　1.2供试品、对照品与试剂 　　头孢地嗪钠来源于浙江永宁药业股份有限公司(批号:S081205);蓝色葡聚糖2000来自sigma公司;头孢地嗪对照品(批号:130520-200501),含量为88.6%,由中国药品生物制品检定所提供;其他试剂均为分析纯。 　　2.试验方法 　　2.1 流动相选择 　　参照中国药典2005年版头孢类聚合物检查方法,以pH7.0的0.3mol/L磷酸盐缓冲液〔0.3mol/L磷酸氢二钠溶液-0.3mol/L磷酸二氢钠溶液(61:39)〕为流动相、检测波长为254nm对样品进行测定,见色谱图1,聚合物峰分裂。因此,将流动相盐的浓度降低,以pH7.0的0.2mol/L磷酸盐缓冲液〔0.2mol/L磷酸氢二钠溶液-0.2mol/L磷酸二氢钠溶液(61:39)〕为流动相对样品进行测定,见色谱图2,聚合物峰峰形好。 　　图1 0.3mol/L磷酸盐缓冲液为流动相聚合物峰分裂图谱 　　图20.2mol/L磷酸盐缓冲液为流动聚合物峰相图谱 　　2.2 色谱条件 　　照分子排阻色谱法(中国药典2005版二部附录V H)测定。 　　用葡聚糖凝胶G-10(40～120μm)为填充剂;柱内径1.5cm,柱高度40cm。以pH7.0的0.2mol/L磷酸盐缓冲液〔0.2mol/L磷酸氢二钠溶液-0.2mol/L磷酸二氢钠溶液(61:39)〕为流动相A,以水为流动相B,流速约为每分钟1.0ml,检测波长为254nm。分别以流动相A、B为流动相,取0.1mg/ml蓝色葡聚糖2000溶液200μl,注入液相色谱仪,理论板数以蓝色葡聚糖2000峰计算均不得低于700。拖尾因子均应小于2.0。在两种流动相系统中蓝色葡聚糖2000峰保留时间的比值应在0.93～1.07之间,对照溶液主峰和供试品溶液中聚合物峰与相应色谱系统中蓝色葡聚糖2000峰的保留时间的比值应在0.93～1.07之间。另以流动相B为流动相,精密量取对照溶液200μl,连续进样5次,峰面积的相对标准偏差应不大于5.0%。 　　2.3 进样量及溶剂的选择 　　参照中国药典2005年版头孢类聚合物检查时所采用的进样浓度,取样品约0.2g,精密称定,置10ml的量瓶中,加流动相A使溶解并稀释到刻度,摇匀,立即精密量取200μl注入液相色谱仪,以流动相A为流动相进行测定,见色谱图2,由图谱可知,进样量过高,检测器过载,为达到进样的准确性,将取样量分别更改为0.